Coombsov test je pozitívny. Antiglobulínový test

Coombsov test je metóda laboratórny výskum vyrobené ovplyvňovaním hemaglutinácie. Je založená na citlivosti protilátok na imunoglobulíny a enzýmové prvky, ako aj na ich schopnosti aglutinovať erytrocyty potiahnuté C3 alebo Lg.

Priama diagnostika Coombs

Používa sa na detekciu protilátok alebo komponentov komplementu namontovaných na vonkajšej strane buniek. Priamy Coombsov test sa vykonáva podľa nasledujúcich krokov.

Použitie takéhoto testu

Diagnóza Direct Coombs sa používa v určitých prípadoch, ako napríklad:

transfúzne účinky;
autoimunitná hemolýza;
liekmi vyvolaná hemolytická anémia.

Nepriamy Coombsov test

Táto diagnostika umožňuje detegovať protilátky proti bunkám v sére, ktoré sa spravidla inkubuje s erytrocytmi darcu typu 0, a potom sa vykoná priamy test. Aplikujte nepriamu diagnostiku Coombs v nasledujúcich prípadoch:

Ako sa pripraviť na analýzu

Existujú určité pravidlá prípravy na prieskum.

Ak je pacient novorodenec, rodičia by si mali uvedomiť, že vyšetrenie pomôže diagnostikovať HN (hemolytická choroba novorodenca).
Ak má pacient podozrenie na hemolytickú anémiu, treba mu vysvetliť, že rozbor mu umožní zistiť, či je spôsobená ochrannými poruchami, liekmi alebo inými faktormi.
Coombsov test, priamy ani nepriamy, nerobí žiadne diétne ani diétne obmedzenia.
Pacienta je potrebné upozorniť na odber krvi zo žily na vyšetrenie a tiež mu povedať, kedy presne bude venepunkcia vykonaná.
Mali by ste byť tiež upozornení na túto možnosť nepohodlie v období obväzovania ruky a samotného zákroku.
Lieky, ktoré môžu ovplyvniť výsledok vzorky, by sa mali vysadiť.

Tieto lieky zahŕňajú:

"streptomycín";
"metyldopa";
"prokaínamid";
sulfónamidy;
"Melfalan";
"chinidín";
"Rifampín";
"Isoniazid";
cefalosporíny;
"Hydralazín";
"chlórpromazín";
"Levodopa";
"tetracyklín";
"difenylhydantoín";
"etosuximid";
"Penicilín";
kyselina mefenamová.

Odber krvi sa robí ráno nalačno.

Ako sa podujatie koná

Coombsov test sa vykonáva v nasledujúcom poradí:

Pri vykonávaní diagnostiky u dospelého pacienta sa po venepunkcii odoberá krv do skúmaviek s EDTA (etyléndiamíntetraacetát).
Novorodencovi sa odoberie krv z pupočnej šnúry do kadičky s EDTA.
Zóna vpichu je stlačená vatový tampón kým sa krvácanie nezastaví.
Keď sa na mieste venepunkcie objaví modrina, sú predpísané teplé obklady.
Po odbere krvi sa pacient môže vrátiť k užívaniu abstinenčných liekov.
Rodičia novorodenca by mali byť upozornení, že môže byť potrebná sekundárna analýza na sledovanie dynamiky anémie.

Výhody Coombsovho testu

Takáto štúdia má niekoľko výhod, a to:

Nevýhody analýzy

Pozitívny Coombsov test je pomerne pracná metóda vyšetrenia, čo naznačuje charakteristickú presnosť vykonania. Pri jeho používaní sa možno stretnúť s určitými ťažkosťami, ktoré súvisia najmä s interpretáciou slabo pozitívnych vplyvov.

Zistilo sa, že chybné negatívne alebo slabo pozitívne reakcie pri výrobe vzoriek Coombs môžu byť dôsledkami neuspokojivého aktívneho premývania buniek, oslabenia antiglobulínového činidla zvyškami séra, ako aj zlúčenín nemastného vzhľadu, na ktorých antiglobulín môže byť fixovaný, pričom stráca svoju účinnosť.

Coombsov test má ešte jednu nevýhodu - nízku stabilitu antiglobulínového činidla, ktorého získavanie a skladovanie má individuálne charakteristiky, čo podobne sťažuje číselné hodnotenie účinku antiglobulínového séra na hemaglutináciu.

Choroby, ktoré možno zistiť počas štúdie

Coombsova diagnostika umožňuje odhaliť určité typy chorôb, ako napríklad:

hemolytická nevoľnosť novorodencov;
rôzne transfúzne reakcie;
autoimunitná hemolýza;
liečivá hemolytická anémia.

K dnešnému dňu sa Coombsov test považuje za pomerne populárny systém krvného testu pre dospelých aj novorodencov. Umožňuje identifikovať mnoho rôznych chorôb.

Schválené na príkaz Roszdravnadzor

o používaní „Súpravy činidiel na stanovenie antigénov a protilátok systému Rhesus ľudskej krvi“
(AGS pre Coombsov test)

TU 9398-102-51203590-2012

RU č. RZN 2013/1255 zo dňa 11.10.2013

I. ÚVOD

Štandardné sérum pre Coombsov test obsahuje špecifické heteroimunitné protilátky proti ľudskej krvnej bielkovine a je určené na použitie v dvoch variantoch reakcie – priamy a nepriamy Coombsov test.

Priamy Coombsov test používa sa na stanovenie senzibilizácie erytrocytov in vivo pri hemolytickom ochorení novorodencov a u pacientov s autoimunitnou formou chronickej hemolytická anémia ako aj niektoré ďalšie podmienky. Vykonanie priameho Coombsovho testu spočíva v tom, že k študovaným erytrocytom, predtým umytým z bielkovín vlastnej plazmy, sa pridá sérum na Coombsov test. Ak boli erytrocyty senzibilizované in vivo, dochádza v dôsledku reakcie k ich aglutinácii.

Nepriamy test Coombs používa sa ako test na zistenie stavu senzibilizácie organizmu, umožňujúci zistiť protilátky, ktoré sú vo voľnom stave v krvnom sére vyšetrovanej osoby; ako test kompatibility transfúznej krvi, keď sa skúma účinok séra príjemcu na erytrocyty predpokladaného darcu; a ako test na stanovenie rôznych skupinových antigénov v erytrocytoch predbežnou expozíciou štandardným séram obsahujúcim protilátky so známou špecifickosťou. Nepriamy Coombsov test (všetky možnosti) vyrobené v dvoch stupňoch, z ktorých prvým je inkubácia testovaného (alebo štandardného) séra so štandardnými (alebo testovanými) erytrocytmi, teda senzibilizácia erytrocytov in vitro. Druhým stupňom je samotná reakcia so sérom pre Coombsov test, ktorý sa vykonáva rovnakým spôsobom ako priamy Coombsov test.

Konečný výsledok reakcie v priamej aj nepriamej Coombsovej reakcii je spôsobený interakciou štandardného séra pre Coombsov test s protilátkami (proteín ľudskej krvi) fixovanými na erytrocytoch. Tento výsledok sa prejavuje vo forme aglutinácie červených krviniek. Na sledovanie aglutinácie je potrebné použiť biely porcelán alebo akýkoľvek biely tanier s navlhčeným povrchom, aby sa kvapky naň nanesené dobre premiešali a neroztiekli sa po povrchu taniera. Zmiešané kvapky zľahka rozotrieme na tanier, približne do veľkosti 2-kopej mince.
II. PRÍPRAVA INGREDIENCIÍ REAKCIE

Testovacie sérum na zistenie prítomnosti a špecifickosti protilátok v ňom sa získava z krvi vyšetrovanej osoby bez pridania konzervačnej látky. Skladujte pri teplote + 4–8 0 C najviac 2 dni alebo v zmrazenom stave - po dobu 1 mesiaca.

Sérum na testovanie kompatibility sa získava rovnakým spôsobom, ale používa sa s dobou použiteľnosti nie dlhšou ako 2 dni.

Erytrocyty určené na stanovenie určitých izoantigénov v nich sa pripravujú s nejakým druhom konzervačnej látky od osoby, ktorej krv sa vyšetruje. Môžete použiť aj sediment erytrocytov z krvi odobratej bez konzervačnej látky.

Pri testovaní kompatibility sa používa darcovská krv, ktorá sa spúšťa ihlou z liekovky pripravenej na transfúziu.

Vo všetkých prípadoch sa erytrocyty premyjú 3-4 krát v skúmavkách z plazmy pridaním 8-10 objemov izotonického roztoku chloridu sodného k jednému objemu erytrocytov, nasleduje miešanie a centrifugácia pri 1500-2000 ot./min počas 5-10 minút (až do úplná sedimentácia erytrocytov). Po každom odstredení sa nadbytočné množstvo odsaje.
III. REAKČNÁ TECHNIKA

Testované erytrocyty sa pripravujú vo forme 5 % suspenzie, pri ktorej sa jedna kvapka premytých erytrocytov štyrikrát zmieša v skúmavke s 19 kvapkami izotonického roztoku chloridu sodného.

Jedna kvapka (0,05 ml) 5 % suspenzie erytrocytov sa prenesie na bielu platňu a rozotrie sa. Platnička sa pretrepe a do 3 minút sa pozoruje, či došlo k aglutinácii erytrocytov. Ak nedôjde k aglutinácii, potom sa sem pridajú 1-2 kvapky štandardného séra na Coombsov test, kvapky sa dôkladne premiešajú, potom sa doštička mierne pretrepe, potom sa nechá jednu až dve minúty pôsobiť a znova sa pretrepe. Zároveň sa 10 minút sleduje výsledok, ktorý sa vyjadruje v prítomnosti alebo neprítomnosti aglutinácie.
Interpretácia výsledkov priameho Coombsovho testu.

Žiadna aglutinácia - negatívny test

Prítomnosť aglutinácie - pozitívny test, ktorý indikuje senzibilizáciu študovaných erytrocytov, t.j. absorpciu protilátok na ne, ku ktorým došlo in vivo v ľudskom tele (novorodenec, pacient). Ak aglutinácia študovaných erytrocytov prišiel pred pridaním k nim sérum na Coombsov test sa neberie do úvahy výsledok priameho testu.
2. Nepriamy Coombsov test

Určené na detekciu izoprotilátok v krvnom sére vyšetrovanej osoby

Používa sa v prípadoch, keď je potrebné zistiť, či krv pacienta, tehotnej ženy, darcu a pod. obsahuje neúplné izoimunitné protilátky a stanoviť ich špecifickosť. Na reakciu sa používa krvné sérum vyšetrovanej osoby a štandardné erytrocyty známej špecificity. Medzi týmito 8-10 alebo viacerými vzorkami erytrocytov by mali byť rozdiely vo faktoroch od iných systémov a je veľmi dôležité, aby každý z týchto faktorov bol obsiahnutý aspoň v jednej vzorke erytrocytov. Panel obsahuje aj vzorky Rh-negatívnych erytrocytov s rôznymi kombináciami antigénov iných systémov, takže medzi nimi sú Duffy-pozitívne a Duffy-negatívne, ktoré by sa zase delili na Kell-pozitívne a Kell-negatívne, Kidd-pozitívne a Kidd-negatívne atď. Ako negatívna kontrola, ak je to možné, sú do reakcie zahrnuté erytrocyty osoby, ktorej sérum sa skúma.

reakčná technika

V stojane je nainštalovaných niekoľko centrifúg alebo iných skúmaviek s objemom 3-10 ml podľa počtu vzoriek erytrocytov zahrnutých do reakcie. Skúmavky sa označia a podľa označenia sa do nich pridá 1 malá kvapka (0,01 ml) premytých štandardných erytrocytov. Do každej skúmavky sa pridajú tri kvapky testovacieho séra, skúmavky sa dôkladne pretrepú, aby sa erytrocyty zmiešali so sérom, a umiestnia sa do termostatu pri 37 °C na 45 minút. Po inkubácii sa skúmavky vyberú z termostatu a erytrocyty sa premyjú pridaním izotonického roztoku chloridu sodného do hornej časti skúmavky, premiešaním a potom odstredením. Premývanie sa opakuje 3-4 krát, vždy sa opatrne odsaje prebytočné množstvo, potom sa do premytých erytrocytov pridajú 2 kvapky izotonického roztoku chloridu sodného, aby sa získala približne 5% suspenzia (pri použití centrifugačných skúmaviek sa môžete obmedziť na premytie dvakrát) .

1 kvapka 5% suspenzie erytrocytov z každej skúmavky sa prenesie na bielu platničku, pridá sa 1-2 kvapky štandardného séra na Coombsov test a sérum sa dôkladne premieša s erytrocytmi. Platňa sa mierne pretrepe, potom sa nechá 1-2 minúty osamote a znova sa periodicky pretrepáva, pričom sa 20 minút sleduje výsledok reakcie.

Interpretácia výsledkov

Žiadne známky aglutinácie (negatívny výsledok) vo všetkých vzorkách znamená, že testované sérum neobsahuje neúplné protilátky proti skupinovým antigénom, ktoré sú obsiahnuté v štandardných erytrocytoch zahrnutých do štúdie.

Ak v niektorých alebo vo väčšine kvapiek, iných ako kontrola, pozorované aglutinácia , to znamená, že testované sérum obsahuje neúplné protilátky proti antigénom erytrocytov. O otázke špecifickosti týchto protilátok sa rozhoduje porovnaním pozitívnych a negatívnych reakcií s antigénnou štruktúrou erytrocytov zahrnutých v reakcii. Otázka aktivity týchto protilátok sa rieši titráciou.

Príklad 1 Aglutinácia sa vyskytla pri všetkých vzorkách erytrocytov obsahujúcich Rh 0 (D) faktor, bez ohľadu na prítomnosť a neprítomnosť iných faktorov tohto systému a iných systémov, pričom pri všetkých Rh 0 (D) - negatívnych vzorkách nebola aglutinácia pozorovaná (teda bez ohľadu na prítomnosti alebo neprítomnosti iných faktorov) - to znamená, že testované sérum obsahuje neúplné protilátky proti Rhesus - Rh 0 (D).

Príklad 2. Aglutinácia sa vyskytla u všetkých vzoriek erytrocytov obsahujúcich Duffyho faktor, bez ohľadu na prítomnosť alebo neprítomnosť antigénov Rh systému a iných systémov, pričom žiadna aglutinácia nebola pozorovaná u všetkých Duffy-negatívnych vzoriek, čo znamená, že študované sérum obsahuje neúplné protilátky - Duffy.

Doplnenie. V prípade, že pracovisko nemá kompletný panel štandardných erytrocytov, ale je potrebné otestovať sérum na prítomnosť protilátok, odporúča sa vykonať štúdiu s 25-30 náhodne odobratými vzorkami erytrocytov od zdravých jedincov. skupiny 0 (I) alebo rovnakého mena ako testovacie sérum. To umožní vyriešiť otázku prítomnosti alebo neprítomnosti protilátok proti väčšine antigénov systému Rh-Hr, Duffy, Kell, Kidd.

Po prijatí pozitívneho výsledku možno v špeciálnej štúdii s kompletným panelom štandardných erytrocytov rozhodnúť o ďalšom závere o špecifickosti detegovaných protilátok.

3. Technika vykonania nepriameho Coombsovho testu ako testu kompatibility transfúznej krvi

Aby sa predišlo inkompatibilite počas transfúzie krvi, musia sa pred transfúziou vykonať nasledujúce testy kompatibility:

Test kompatibility krvných skupín ABO, ktorý sa vykonáva na rovnom povrchu pri izbovej teplote.
Testy na kompatibilitu Rh faktorom a inými izoantigénmi.

Inkompatibilita pre Rh faktor a pre niektoré ďalšie izoantigény môže závisieť jednak od prítomnosti kompletných protilátok (stanovených vo fyziologickom roztoku pri teplote 37 0 C v skúmavkách), ale aj najčastejšie od neúplných protilátok, pre ktoré je nepriamy Coombsov test. najcitlivejšie.

Jedna malá (0,01 ml) kvapka premytých darcovských erytrocytov odobratých ihlou z liekovky s krvou určenou na transfúziu sa prenesie na dno centrifúgy alebo inej 3-4 ml skúmavky a pridajú sa 3 kvapky séra pacienta do to. Skúmavka sa pretrepe, aby sa erytrocyty zmiešali so sérom, a potom sa umiestni do termostatu pri 37 °C na 45 minút. Po inkubácii sa do hornej časti skúmavky pridá izotonický roztok chloridu sodného, obsah skúmavky sa premieša a 5-10 minút odstreďuje. Toto premytie erytrocytov sa opakuje 3-krát, pričom sa vždy opatrne odstráni infúzia. Pri použití centrifugačných skúmaviek sa môžete obmedziť na dve umývania. K premytým erytrocytom sa pridajú 2 kvapky izotonického roztoku chloridu sodného, čím sa získa približne 5 % suspenzia.

1 kvapka 5% suspenzie erytrocytov sa prenesie na bielu platničku, pridá sa 1-2 kvapky štandardného séra na Coombsov test a sérum sa dôkladne premieša s erytrocytmi. Potom sa platňa mierne pretrepe, nechá sa 1-2 minúty a pravidelne sa znova pretrepáva, pričom sa pozoruje výsledok počas 20 minút.

Poznámka: Pri Rh inkompatibilite sa aglutinácia zvyčajne vyskytuje v priebehu prvej minúty, ale pri nízkom titri Rh protilátok (alebo iných protilátok) môže dôjsť k aglutinácii neskôr, niekedy do dvadsiatej minúty.
Interpretácia výsledku:

Sú viditeľné aglutináty vo forme hrudiek na vyčírenom alebo úplne odfarbenom pozadí - to znamená, že krv darcu nezlučiteľné s krvou príjemcu a nemožno ho podať transfúziou.

Neprítomnosť známky aglutinácie znamená, že krv pacienta neobsahuje neúplné protilátky proti erytrocytom darcu vo vzťahu k Rh faktoru a iným izoantigénom, ku ktorým by sa mohli vytvárať neúplné protilátky.

Nepriamy Coombsov test je citlivý iba na neúplné protilátky.
4. Technika nepriamy Coombsov test na stanovenie antigénnej štruktúry erytrocytov

Tento test sa používa na stanovenie prítomnosti alebo neprítomnosti akéhokoľvek antigénu skupiny erytrocytov pomocou štandardného séra obsahujúceho zodpovedajúce protilátky v neúplnej forme.

Najčastejšie sa nepriamy Coombsov test používa na stanovenie antigénov Kell (K), Duffy (Fy), Kidd (Jk) a tiež na stanovenie slabého antigénu systému Rh (Du).

Pred stanovením antigénov by sa študované erytrocyty mali otestovať priamym Coombsovým testom. Pri pozitívnom výsledku priameho testu - stanovenie antigénov nemožno vykonať nepriamy Coombsov test a na tento účel je potrebné použiť iné reakcie.

Na reakciu sa používajú centrifúgy alebo iné skúmavky s objemom 3-4 ml v množstve troch: jedna na testovanú vzorku erytrocytov a dve na 1 malú (0,01 ml) kvapku premytých trikrát premytých testovacích erytrocytov. na dno prvej skúmavky sa do druhej pridajú kontrolné erytrocyty, ktoré obsahujú požadovaný antigén (napríklad Duffy-pozitívny) a v tretej skúmavke - negatívna kontrola (Duffy-negatívna). Pridajte 2-3 kvapky štandardného séra (v tomto príklade anti-Duffy) do všetkých skúmaviek. Skúmavky sa pretrepú, aby sa obsah premiešal, a umiestnia sa do termostatu pri 37 °C na 45 minút. Po takejto inkubácii sa skúmavky vyberú z termostatu, do vrchnej časti sa pridá izotonický roztok chloridu sodného, obsah sa dôkladne premieša a odstreďuje pri 1500-2000 000 ot./min. počas 5-10 minút. Po odstredení sa nadbytočné množstvo opatrne odsaje a toto premytie erytrocytov sa opakuje 4-krát. (Pri použití centrifugačných skúmaviek sa môžete obmedziť na umývanie dvakrát).

K premytým erytrocytom sa pridajú 2 kvapky izotonického roztoku chloridu sodného, čím sa získa približne 5 % suspenzia. 1 kvapka 5% suspenzie erytrocytov z každej skúmavky sa prenesie na bielu platňu, do každej kvapky erytrocytov sa pridajú 1-2 kvapky štandardného séra pre Coombsov test a premiešajú sa. Platňa sa mierne pretrepe, potom sa nechá 1-2 minúty osamote a znova sa periodicky pretrepáva, pričom sa 20 minút sleduje priebeh reakcie.
Interpretácia výsledkov

Prítomnosť aglutinácie erytrocyty ( pozitívny výsledok) znamená, že krv obsahuje požadovaný antigén (v tomto príklade Duffy-pozitívna krv).

Žiadna aglutinácia (negatívny výsledok) znamená, že testovaná krv neobsahuje požadovaný antigén (Duffy-negatívny).

Výsledok sa počíta ako pravdivý po kontrole kontrolných vzoriek, t. j. v príklade pozitívny výsledok s Duffy-pozitívnou vzorkou a negatívny výsledok s Duffy-negatívnou vzorkou.

5. Formulár na uvoľnenie

Činidlo je dostupné v tekutej forme v 5 alebo 10 ml injekčných liekovkách (1 ml obsahuje 10 dávok). Azid sodný sa používa ako konzervačná látka v konečnej koncentrácii 0,1 %.

6.Skladovanie

Čas použiteľnosti - dva roky v chladničke pri 2-8°C. Otvorená fľaša je vhodná na použitie pri skladovaní vo vzduchotesnej chladničke ZATVORENÉ počas celej doby použiteľnosti.

Dôvody na reklamáciu sú: nedostatočná aktivita, nešpecifickosť, porušenie celistvosti fľaše, prítomnosť vločiek, expirované činidlo. Pri reklamácii uveďte dátum prijatia, dodávateľa (ak ste dostali tovar od iného výrobcu), číslo šarže a dôvody, pre ktoré bolo činidlo vyhodnotené ako nevhodné. Priložte protokol s výsledkami testu s činidlami a 2-3 neotvorené fľaštičky s činidlami
Reklamácie je potrebné zaslať výrobcovi LLC "MEDIKLON": 127276

- antiglobulínový test zameraný na zistenie v Rh-negatívnej krvi neúplných antierytrocytových protilátok proti Rh faktoru - špecifickému proteínu, ktorý sa nachádza na povrchu erytrocytov Rh-pozitívnej krvi. Existujú dva typy tohto testu: priamy - detekcia protilátok na povrchu červených krviniek, nepriamy - detekcia protilátok v krvnom sére. Priamy test sa vykonáva pri diagnostike a monitorovaní liečby krvných ochorení: hemolytická anémia, hemolytická choroba novorodenca a iné. Nepriamy test sa vykonáva na posúdenie kompatibility krvi darcu a príjemcu počas transfúzie, ako aj na zistenie prítomnosti a rizika Rh konfliktu pri plánovaní a riadení tehotenstva. Materiálom pre Coombsov test je venózna krv, štúdia sa uskutočňuje metódami založenými na aglutinačnej reakcii. Zvyčajne oba testy dávajú negatívny výsledok. Analýza sa vykonáva do jedného dňa. Celkovo bolo v Moskve 87 adries, kde bolo možné vykonať túto analýzu.

Coombsov test - klinická štúdia Rh-negatívna krv, zameraná na detekciu protilátok proti Rh faktoru. Test sa používa na identifikáciu rizika vzniku Rhesusovho konfliktu a hemolytických reakcií. U každého človeka obsahuje povrch erytrocytov určitý súbor antigénov alebo aglutinogénov - zlúčenín rôzneho charakteru, ktorých prítomnosť alebo neprítomnosť sa používa na posúdenie krvnej skupiny a Rh faktora. Existuje mnoho druhov antigénov, v lekárskej praxi majú najväčší praktický význam aglutinogény A a B, ktoré určujú krvnú skupinu, a aglutinogén D, Rh faktor. S pozitívnym Rh faktorom sa na vonkajšej membráne erytrocytov detegujú antigény D, s negatívnym - nie.

Coombsov test, ktorý sa tiež nazýva antiglobulínový test, je zameraný na zistenie neúplných antierytrocytových protilátok proti systému Rh faktora v krvi. Protilátky proti Rh faktoru sú špecifické imunoglobulíny, ktoré sa tvoria v Rh negatívnej krvi, keď do nej vstúpia erytrocyty s aglutinogénmi D. Môže k tomu dôjsť pri zmiešaní krvi plodu a tehotnej ženy, pričom krvné transfúzie sa vykonávajú bez predchádzajúcej krvnej skupiny. Coombsov test existuje v dvoch verziách – priamej a nepriamej. Pri vykonávaní priameho Coombsovho testu sa detegujú protilátky pripojené k povrchu červených krviniek. Štúdia sa používa na určenie príčiny hemolytickej reakcie. Nepriamy Coombsov test je zameraný na detekciu protilátok proti erytrocytom v krvnej plazme. Je potrebné zistiť kompatibilitu krvi darcu a príjemcu alebo matky a plodu, pomáha predchádzať rozvoju Rhesusovho konfliktu a následnej hemolýze červených krviniek.

Krv pre oba varianty Coombsovho testu sa odoberá zo žily. Analýza sa vykonáva aglutinačnou metódou s použitím antiglobulínového séra. Výsledky štúdie sa využívajú v hematológii pri zisťovaní príčin hemolytických reakcií, v chirurgii a resuscitácii pri krvných transfúziách, v pôrodníctve a gynekológii pri monitorovaní tehotenstiev u žien s Rh negatívnou krvou.

Indikácie

Pri hemolytických reakciách (deštrukcia červených krviniek) rôzneho pôvodu sa predpisuje priamy Coombsov test, ktorý zisťuje protilátky naviazané na povrchu červených krviniek. Štúdia je indikovaná pri primárnej autoimunitnej hemolytickej anémii, potransfúznej hemolytickej anémii, hemolytickom ochorení novorodenca, hemolýze červených krviniek spôsobenej autoimunitným, nádorovým príp. infekčné choroby, ako aj prijímanie lieky napríklad chinidín, metyldopa, prokaínamid. Na zabránenie vzniku Rhesusovho konfliktu sa používa nepriamy Coombsov test, ktorý zisťuje protilátky v krvnej plazme. Je indikovaný pacientom pri príprave na transfúziu krvi, ako aj tehotným ženám s negatívnym Rh faktorom za predpokladu, že budúci otec dieťaťa má pozitívny Rh faktor.

Aby sa určila Rh kompatibilita, Coombsov test sa nepodáva pacientom s Rh-pozitívnou krvou. V týchto prípadoch sú už na povrchu červených krviniek antigény, tvorbu protilátok nedokáže spustiť krvná transfúzia ani vniknutie krvi plodu do krvného obehu tehotnej. Štúdia tiež nie je indikovaná pre tehotné ženy, ak majú obaja rodičia negatívny Rh faktor, dedičnú recesívnu vlastnosť. Dieťa v takýchto pároch má vždy Rh negatívna krv imunologický konflikt s matkou je nemožný. Pri hemolytických patológiách sa antiglobulínový test nepoužíva na sledovanie úspešnosti liečby, pretože výsledky neodrážajú aktivitu procesu deštrukcie erytrocytov.

Obmedzením Coombsovho testu je zložitosť výskumného postupu – na získanie spoľahlivých výsledkov je potrebné dodržať teplotné a časové podmienky, pravidlá prípravy činidiel a biomateriálu. Výhodou Coombsovho testu je jeho vysoká citlivosť. Pri hemolytickej anémii zostávajú výsledky tohto testu pozitívne, aj keď sa hemoglobín, bilirubín a retikulocyty vrátia do normálu.

Príprava na analýzu a zber materiálu

Materiál na vykonanie Coombsovho testu je venózna krv. Neexistujú žiadne špeciálne požiadavky na čas odberu krvi a na prípravu pacienta. Ako pri každej štúdii sa odporúča urobiť si prestávku po jedle aspoň 4 hodiny a na posledných 30 minút prestať fajčiť, fyzická aktivita vyhnúť sa emočnému stresu. Tiež sa oplatí vopred prediskutovať s lekárom potrebu prestať užívať lieky – niektoré lieky môžu skresliť výsledky Coombsovho testu. Krv sa odoberá injekčnou striekačkou z loketnej žily, menej často zo žily na chrbte ruky. V priebehu niekoľkých hodín je materiál doručený do laboratória.

Pri vykonávaní priameho Coombsovho testu sa do krvného séra pacienta pridá antiglobulínové sérum. Po určitom čase sa zmes vyšetruje na prítomnosť aglutinátov – tie sa tvoria, ak sú na červených krvinkách protilátky. Pri pozitívnom výsledku sa určí aglutinačný titer. Nepriamy Coombsov test pozostáva z viacerých krokov. Po prvé, protilátky prítomné v sére sú počas inkubácie fixované na injikovaných erytrocytoch. Potom sa do vzorky pridá antiglobulínové sérum, po chvíli sa stanoví prítomnosť a titer aglutinátov. Doba analýzy je 1 deň.

Normálne výsledky

Za normálnych okolností je výsledok priameho Coombsovho testu negatívny (-). To znamená, že v krvi nie sú žiadne protilátky spojené s červenými krvinkami a nemôžu byť príčinou hemolýzy. Normálny výsledok nepriameho Coombsovho testu je tiež negatívny (-), to znamená, že v krvnej plazme nie sú žiadne protilátky proti Rh faktoru. Pri príprave na transfúziu krvi pre príjemcu to znamená kompatibilitu s krvou darcu, pri sledovaní tehotenstva - absencia Rh senzibilizácie matky, nízke riziko vzniku imunologického konfliktu. Fyziologické faktory ako stravovacie návyky resp fyzická aktivita, nemôže ovplyvniť výsledok testu. Ak je teda výsledok pozitívny, je potrebná konzultácia s lekárom.

Diagnostická hodnota analýzy

Pozitívny výsledok Coombsovho testu je vyjadrený kvalitatívne, od (+) do (++++), alebo kvantitatívne, v titroch od 1:16 do 1:256. Stanovenie koncentrácie protilátok na erytrocytoch a v krvnom sére sa vykonáva v oboch typoch vzoriek. Pri pozitívnom výsledku priameho Coombsovho testu sa na vonkajšej membráne červených krviniek zistia protilátky, ktoré vedú k zničeniu týchto krviniek. Príčinou môže byť transfúzia krvi bez predchádzajúcej typizácie – potransfúzna hemolytická reakcia, ako aj novorodenecká erytroblastóza, hemolytická reakcia v dôsledku užívania liekov, primárna alebo sekundárna autoimunitná hemolytická anémia. Sekundárnu deštrukciu erytrocytov môže spôsobiť systémový lupus erythematosus, Evansov syndróm, Waldenströmova makroglobulinémia, paroxyzmálna studená hemoglobinúria, chronická lymfocytová leukémia, lymfóm, infekčná mononukleóza, syfilis, mykoplazmatická pneumónia.

Pozitívny výsledok nepriameho Coombsovho testu naznačuje prítomnosť protilátok proti Rh faktoru v plazme. V praxi to znamená, že došlo k Rh senzibilizácii, existuje možnosť rozvoja Rh konfliktu po infúzii darcovskej krvi počas tehotenstva. Aby sa predišlo komplikáciám v tehotenstve, ženy s pozitívnym výsledkom Coombsovho testu sa umiestňujú do špeciálnych záznamov.

Liečba odchýlok od normy

Coombsov test sa týka izoserologických štúdií. Jeho výsledky umožňujú identifikovať hemolytickú reakciu, ako aj určiť kompatibilitu krvi darcu a príjemcu, matky a plodu, aby sa zabránilo rozvoju konfliktu Rhesus. Ak je výsledok testu pozitívny, potom je potrebné požiadať o radu ošetrujúceho lekára - pôrodníka-gynekológa, hematológa, chirurga.

Na doštičku alebo podložné sklíčko sa nanesie pipetami (rôzne!) 1 veľká kvapka O (I), A (II), B (III) séra. Keď si všimnete čas, pomocou čistej sklenenej tyčinky alebo čistého uhla podložného sklíčka sa kvapky séra kombinujú s kvapkami krvi. Stanovenie trvá 5 minút, platnička sa pretrepe, potom sa do každej zmesi kvapiek pridá 1 kvapka soľného roztoku a vyhodnotia sa výsledky. Je lepšie, ak sú sérum 2 rôzne série. Výsledky krvných skupín sa musia zhodovať v oboch sérových sériách.

Vyhodnotenie výsledkov izohemaglutinácie:

izohemaglutinácia. Pri pozitívnej reakcii sa v zmesi objavia drobné červené zrnká lepkavých červených krviniek. Zrná sa spájajú do väčších zŕn a tie do vločiek. Sérum je takmer sfarbené;

pri negatívnej reakcii zostane zmes rovnomerne sfarbená do 5 minút ružová farba a nenašli sa žiadne zrná;

pri práci s 3 sérami skupín O(I), A(II), B(III) sú možné 4 kombinácie reakcií:

ak všetky 3 séra poskytli negatívnu reakciu, to znamená, že zmes je rovnomerne sfarbená do ružova - toto je krvná skupina O (I);
ak iba sérum skupiny A (II) malo negatívnu reakciu a séra O (I) a B (III) dali pozitívnu reakciu, to znamená, že sa objavili zrná - toto je krvná skupina A (II);
sérum skupiny B(II) malo negatívnu reakciu a sérum skupiny O(I) a A(II) pozitívne reagovalo - toto je krvná skupina B(III).

všetky 3 séra poskytli pozitívne reakcie - testovaná krv skupiny AB (IV). V tomto prípade sa uskutoční štúdia so sérom skupiny AB (IV).

Poznámka! Kvapky skúmanej krvi by mali byť 5-10 krát menšie ako kvapky séra.

Chyby izohemaglutinácie.

Neaglutinácia tam, kde by mala byť, a aglutinácia tam, kde by nemala byť. Môže to byť spôsobené nízkym titrom séra a slabou aglutináciou erytrocytov.

Prítomnosť aglutinácie tam, kde by nemala byť- ide o pseudoaglutináciu, kedy kôpky erytrocytov tvoria „stĺpce mincí“. Hojdanie taniera alebo pridávanie fyziologického roztoku ich ničí.

Panaglutinácia, kedy sérum zlepí všetky červené krvinky, vrátane vlastnej krvnej skupiny. Do 5. minúty príznaky aglutinácie zmiznú.

Existuje aj takzvaná studená panaglutinácia, kedy sa erytrocyty zlepia kvôli nízkej teplote vzduchu (pod 15 °C) v miestnosti.

Vo všetkých týchto prípadoch sa uskutočňuje buď opakovaná reakcia, alebo podľa štandardných erytrocytov.

Stanovenie Rh-príslušnosti krvi

Na určenie Rh príslušnosti, t.j. na zistenie prítomnosti alebo neprítomnosti antigénov Rh systému v krvi ľudí, sa používajú štandardné anti-Rhesus séra (reagenty), ktoré sa líšia špecifickosťou, t.j. obsahujú protilátky vo vzťahu k rôzne antigény tohto systému. Na stanovenie Rh 0 (D) antigénu sa najčastejšie používa anti-Rhesus sérum s prídavkom 10% roztoku želatíny alebo sa používa štandardné anti-Rhesus činidlo vopred pripravené s 33% roztokom polyglucínu. Na získanie presnejších výsledkov štúdie, ako aj na detekciu antigénov iných sérologických systémov sa používa Coombsov test (je tiež veľmi citlivý pri určovaní kompatibility transfúzovanej krvi). Na štúdium sa používa natívna krv alebo pripravená s nejakým druhom konzervačnej látky. V tomto prípade by sa krv mala umyť z konzervačnej látky desaťnásobným objemom izotonického roztoku chloridu sodného. Pri určovaní Rh-príslušnosti- Rh 0 (D) mali by sa použiť dve vzorky séra alebo anti-Rhesus činidla z dvoch rôznych sérií a súčasne by sa mali použiť štandardné erytrocyty získané z krvi od Rh-pozitívnych (Rh +) a Rh-negatívnych (Rh -) jedincov. použiť na kontrolu. Pri stanovení ďalších izoantigénov treba podľa toho použiť kontrolné erytrocyty, ktoré obsahujú alebo chýbajú antigén, proti ktorému sú protilátky namierené v štandardnom sére.

Nekompletné tepelné aglutiníny sú najbežnejším typom protilátok schopných spôsobiť rozvoj autoimunitnej hemolytickej anémie. Tieto protilátky patria do IgG, zriedkavo - do IgM, IgA.

COOMBSOV TEST

Coombsov test: úvod. Coombsov test je laboratórna diagnostická metóda založená na hemaglutinačnej reakcii.

Hlavnou metódou diagnostiky autoimunitnej hemolytickej anémie je Coombsov test. Je založená na schopnosti protilátok špecifických pre imunoglobulíny (najmä IgG) alebo zložky komplementu (najmä C3) aglutinovať erytrocyty potiahnuté IgG alebo C3.

Väzba IgG a C3b na erytrocyty sa pozoruje pri autoimunitnej hemolytickej anémii a liekmi vyvolanej imunitnej hemolytickej anémii. Priamy Coombsov test. Priamy Coombsov test sa používa na detekciu protilátok alebo zložiek komplementu fixovaných na povrchu červených krviniek. Vykonáva sa takto:

Na získanie protilátok proti ľudským imunoglobulínom (antiglobulínové sérum) alebo komplementu (antikomplementárne sérum) sa zviera imunizuje ľudským sérom, imunoglobulínmi alebo ľudským komplementom. Sérum získané zo zvieraťa sa čistí od protilátok proti iným proteínom.

Erytrocyty pacienta sa premyjú fyziologickým roztokom, aby sa úplne odstránilo sérum, ktoré neutralizuje protilátky proti imunoglobulínom a komplementu a môže spôsobiť falošne negatívny výsledok.

Ak sú protilátky alebo zložky komplementu fixované na povrchu erytrocytov, pridanie antiglobulínu alebo antikomplementárneho séra spôsobuje aglutináciu erytrocytov.

Priamy Coombsov test sa používa v nasledujúcich prípadoch:

autoimunitná hemolýza.

Hemolytická choroba novorodenca.

Imunitná hemolytická anémia vyvolaná liekmi.

Hemolytické transfúzne reakcie. Nepriamy Coombsov test. Nepriamy Coombsov test zisťuje protilátky proti erytrocytom v sére. Na tento účel sa sérum pacienta inkubuje s erytrocytmi darcu skupiny 0 a potom sa vykoná priamy Coombsov test.

Nepriamy Coombsov test sa používa v nasledujúcich prípadoch:

Stanovenie individuálnej kompatibility krvi darcu a príjemcu.

Detekcia aloprotilátok vrátane protilátok, ktoré spôsobujú hemolytické transfúzne reakcie.

Stanovenie povrchových erytrocytových antigénov v lekárskej genetike a súdnom lekárstve.

Potvrdenie identických dvojčiat pri transplantácii kostnej drene.

Na vykonanie biologického testu sa krv čo najrýchlejšie podá transfúziou (najlepšie prúdom). Po transfúzii 25 ml krvi sa hadička systému upne svorkou. Potom sa urobí pauza na 3 minúty, počas ktorej sa sleduje stav príjemcu. Na prípravu biologickej vzorky sa trikrát vstrekne 25 ml krvi. Na konci testu (po transfúzii prvých 75 ml krvi v zlomkových dávkach 25 ml v intervaloch 3 minút) sa systém nastaví na požadovanú rýchlosť transfúzie. Pri transfúzii pacienta s viac ako jednou injekčnou liekovkou krvi je potrebné vytiahnuť ihlu zo žily. V tomto prípade sa ihla vyberie zo skúmavky liekovky, z ktorej krv vytiekla, a vloží sa do ďalšej liekovky. Rúrka systému (guma alebo plast) je v tomto momente upnutá svorkou. Ak je počas transfúzie krvi potrebné intravenózne podanie akéhokoľvek iného lieku príjemcovi, vykoná sa to prepichnutím gumovej hadičky systému. Prepichnutie plastovej trubice je neprijateľné, pretože neopadáva. Po každej transfúzii krvi musí byť pacient sledovaný, aby sa identifikoval a včas eliminoval možné komplikácie, počítajúc do toho alergické reakcie. Telesná teplota sa má merať 2 hodiny po ukončení transfúzie krvi. So zvýšením jeho merania sa musí opakovať v nasledujúcich 4 hodinách každú hodinu. Rovnako dôležité je sledovanie močenia a zloženia moču, čo umožňuje zistiť prítomnosť toxickej potransfúznej reakcie. Vznik oligúrie a anúrie po transfúzii krvi, prítomnosť krviniek a bielkovín v moči sú priamym znakom rozvoja posttransfúznej hemolýzy.

Na povrchu erytrocytov je veľký počet antigény. Podľa typu týchto antigénov sa rozlišujú krvné skupiny, najviac skúmanými skupinami sú ABO, Rh, Kell, Duffy a mnohé ďalšie.

priemerná cena vo vašom regióne: 2645 od 2645 ... do 2645

1 lab túto analýzu vo vašej oblasti

Popis štúdie

Príprava na štúdium: Krv sa odoberie zo žily a následne sa sérum (krvná plazma bez fibrinogénu) získa prirodzenou koaguláciou alebo vyzrážaním fibrinogénu. Študovaný materiál: Odber krvi

Na povrchu erytrocytov je veľké množstvo antigénov. Podľa typu týchto antigénov sa rozlišujú krvné skupiny, najviac študovanými skupinami sú ABO, Rh, Kell, Duffy a mnohé ďalšie systémy. Normálne sú v krvi protilátky proti antigénom inej skupiny, ale počas transfúzie krvi, tehotenstva, autoimunitné ochorenia a iné sa zisťujú protilátky proti ich antigénom.Neúplné protilátky proti erytrocytom

Metóda

Nepriama Coombsova reakcia je založená na detekcii aglutinácie (zhlukovania) erytrocytov, ktoré majú na povrchu neúplné protilátky, čo sa objaví po pridaní antiglobulínového séra.

V prvej fáze sa do jednej skúmavky pridajú darcovské erytrocyty (skupina O(I), Rh+) a testovacie sérum. Ak sú v testovacom sére prítomné neúplné protilátky proti erytrocytom, potom sú fixované na povrchu darcovských erytrocytov.

V druhom štádiu sa na sklo aplikujú darcovské erytrocyty s protilátkami (ak existujú) a štandardné antiglobulínové sérum s protilátkami proti ľudským imunoglobulínom. Ak sú v prvom štádiu protilátky proti erytrocytom fixované na povrchu erytrocytov, potom sa po pridaní štandardného séra erytrocyty zlepia v dôsledku interakcie protilátok.

Referenčné hodnoty - norma
(Nepriama Coombsova reakcia (antiglobulínový test, detekcia neúplných protilátok proti erytrocytom), krv)

Informácie týkajúce sa referenčných hodnôt ukazovateľov, ako aj samotného zloženia ukazovateľov zahrnutých do analýzy sa môžu v závislosti od laboratória mierne líšiť!

norma:

Normálne by protilátky proti vlastným erytrocytom nemali byť, pri nastavení Coombsovej reakcie nedochádza k agregácii erytrocytov.

Indikácie

Štúdium humorálnej špecifickej imunity v prípade podozrenia na autoimunitné reakcie v tele, Rh konflikt medzi matkou a plodom, stanovenie kompatibility krvi darcu a príjemcu