A Coombs-teszt pozitív. Antiglobulin teszt

A Coombs-teszt egy módszer laboratóriumi kutatás hemagglutináció befolyásolásával készült. Az immunglobulinokkal és enzimelemekkel szembeni antitestek érzékenységén, valamint a C3-mal vagy Lg-vel bevont eritrociták agglutináló képességén alapul.

Coombs közvetlen diagnózisa

A sejtek külsejére szerelt antitestek vagy komplement komponensek kimutatására szolgál. A közvetlen Coombs-teszt a következő lépésekkel hajtható végre.

Egy ilyen teszt használata

A közvetlen Coombs-diagnózist bizonyos esetekben alkalmazzák, például:

transzfúziós hatások;
autoimmun hemolízis;
gyógyszer által kiváltott hemolitikus anémia.

Közvetett Coombs-teszt

Ez a diagnosztika lehetővé teszi a sejtek elleni antitestek kimutatását a szérumban, amelyet általában 0-s típusú donor eritrocitákkal inkubálnak, majd közvetlen tesztet végeznek. Alkalmazzon közvetett Coombs-diagnosztikát a következő esetekben:

Hogyan készüljünk fel az elemzésre

A felmérésre való felkészülésnek van néhány szabálya.

Ha a beteg újszülött, a szülőknek tisztában kell lenniük azzal, hogy a tesztelés segít a HN (az újszülött hemolitikus betegsége) diagnosztizálásában.
Ha a betegnek hemolitikus vérszegénység gyanúja merül fel, el kell magyarázni neki, hogy az elemzés lehetővé teszi számára, hogy megtudja, hogy ezt védőzavarok, gyógyszerek vagy egyéb tényezők okozzák-e.
A Coombs-teszt, akár közvetlen, akár közvetett, nem ír elő semmilyen étrendi vagy étrendi korlátozást.
Értesíteni kell a beteget, hogy a vizsgálathoz vénából vért vesznek, és azt is közölni kell vele, hogy pontosan mikor kerül sor a vénapunkcióra.
Figyelmeztetni kell a lehetőségre is kényelmetlenség a kar bekötése és maga az eljárás ideje alatt.
Azokat a gyógyszereket, amelyek befolyásolhatják a minta eredményét, abba kell hagyni.

Ezek a gyógyszerek a következők:

"Sztreptomicin";
"metildopa";
"Prokainamid";
szulfonamidok;
"Melphalan";
"Kinidin";
"Rifampin";
"Izoniazid";
cefalosporinok;
"Hidralazin";
"Klórpromazin";
"Levodopa";
"Tetraciklin";
"difenilhidantoin";
"Ethosuximid";
"Penicillin";
mefenaminsav.

A vérvétel reggel éhgyomorra történik.

Hogyan zajlik az esemény

A Coombs-tesztet a következő sorrendben hajtják végre:

Felnőtt betegeknél végzett diagnosztika során a vénapunkciót követően vért vesznek EDTA-val (etilén-diamin-tetraacetát) tartalmazó csövekbe.
Az újszülötttől vért vesznek a köldökzsinórból egy edénybe EDTA-val.
A szúrási zóna le van nyomva fültisztító pálcika amíg a vérzés el nem áll.
Amikor zúzódás jelenik meg a vénapunkció helyén, meleg borogatást írnak elő.
A vérvétel után a beteg visszatérhet az elvonó gyógyszerek szedéséhez.
Az újszülött szüleit tájékoztatni kell arról, hogy másodlagos elemzésre lehet szükség a vérszegénység dinamikájának nyomon követéséhez.

A Coombs-teszt előnyei

Egy ilyen tanulmánynak van néhány előnye, nevezetesen:

Az elemzés hátrányai

A pozitív Coombs-teszt meglehetősen munkaigényes vizsgálati módszer, amely a végrehajtás jellegzetes pontosságára utal. Használata során nehézségekbe ütközhet, különösen a gyengén pozitív hatások értelmezésével kapcsolatban.

Megállapítást nyert, hogy a Coombs-minták előállítása során fellépő hibás negatív vagy gyengén pozitív reakciók következményei lehetnek a sejtek nem kielégítő aktív mosásának, az antiglobulin reagens szérummaradványok általi gyengülésének, valamint olyan nem zsíros megjelenésű vegyületeknek, amelyeken Az antiglobulin rögzíthető, miközben elveszíti hatékonyságát.

A Coombs-tesztnek van még egy hátránya - az antiglobulin reagens alacsony stabilitása, amelynek beszerzése és tárolása egyedi jellemzőkkel rendelkezik, ami hasonlóképpen megnehezíti az antiglobulin szérum hemagglutinációra gyakorolt hatásának számszerű értékelését.

A vizsgálat során kimutatható betegségek

A Coombs-diagnosztika lehetővé teszi bizonyos típusú betegségek kimutatását, mint például:

újszülöttek hemolitikus rossz közérzete;
különböző transzfúziós reakciók;
autoimmun hemolízis;
orvosi hemolitikus anémia.

A mai napig a Coombs-teszt meglehetősen népszerű vérvizsgálati rendszernek számít felnőtteknél és újszülötteknél egyaránt. Lehetővé teszi számos különböző betegség azonosítását.

Roszdravnadzor rendeletével jóváhagyva

"Az emberi vér Rhesus rendszerében lévő antigének és antitestek meghatározására szolgáló reagenskészlet" használatáról
(AGS for Coombs teszt)

TU 9398-102-51203590-2012

RU No. RZN 2013/1255, 2013.10.11.

I. BEVEZETÉS

A Coombs-teszthez használt standard szérum specifikus heteroimmun antitesteket tartalmaz az emberi vérfehérje ellen, és kétféle reakcióban használható – a közvetlen és a közvetett Coombs-tesztben.

Közvetlen Coombs-teszt Az eritrociták in vivo érzékenységének meghatározására használják újszülöttek hemolitikus betegségében és krónikus autoimmun formájú betegeknél hemolitikus anémia valamint néhány egyéb feltétel. Közvetlen Coombs-teszt elvégzése abból áll, hogy a Coombs-teszthez szérumot adnak a vizsgált eritrocitákhoz, amelyeket előzőleg kimostak saját plazma fehérjéiből. Ha a vörösvértesteket in vivo szenzitizálták, akkor a reakció eredményeként agglutinációjuk következik be.

Közvetett teszt Coombs tesztként használják a szervezet szenzibilizációs állapotának kimutatására, lehetővé téve a vizsgált személy vérszérumában szabad állapotban lévő antitestek kimutatását; a transzfundált vér kompatibilitásának vizsgálataként, amikor a recipiens szérumának a tervezett donor vörösvértesteire gyakorolt hatását vizsgálják; valamint tesztként különböző csoportantigének meghatározására eritrocitákban ismert specifitású antitesteket tartalmazó standard szérumokkal való előzetes expozícióval. Közvetett Coombs-teszt (minden lehetőség) előállított két szakaszban, amelyek közül az első a teszt (vagy standard) szérum standard (vagy teszt) eritrocitákkal történő inkubálása, azaz az eritrociták in vitro szenzitizálása. A második szakasz a tényleges reakció a szérummal a Coombs-teszthez, amelyet ugyanúgy hajtanak végre, mint a közvetlen Coombs-teszt.

A reakció végeredménye mind a közvetlen, mind a közvetett Coombs-ban a Coombs-teszthez használt standard szérum és az eritrocitákon rögzített antitestek (humán vérfehérje) kölcsönhatása miatt következik be. Ez az eredmény a vörösvértestek agglutinációjában nyilvánul meg. Az agglutináció ellenőrzésére fehér porcelánt vagy bármilyen fehér tányért kell nedvesített felülettel használni, hogy az arra felvitt cseppek jól elkeveredjenek és ne terüljenek szét a tányér felületén. A kevert cseppeket enyhén kell a tányérra kenni, körülbelül 2 kopejkás érme méretig.
II. A REAKCIÓ ÖSSZETEVŐINEK ELŐKÉSZÍTÉSE

A benne lévő antitestek jelenlétének és specificitásának meghatározására szolgáló tesztszérumot a vizsgált személy véréből nyerik, tartósítószer hozzáadása nélkül. Tárolja + 4-8 0 C hőmérsékleten legfeljebb 2 napig vagy fagyasztott állapotban - 1 hónapig.

A kompatibilitási vizsgálathoz használt szérumot ugyanúgy kapják meg, de legfeljebb 2 nap eltarthatósággal használják.

A bennük lévő bizonyos izoantigének meghatározására szolgáló eritrocitákat valamilyen tartósítószerrel állítják elő abból a személyből, akinek vérét vizsgálják. Használhat tartósítószer nélkül vett vörösvértest-üledéket is.

A kompatibilitás vizsgálatakor donorvért használnak, amelyet egy tűn keresztül engednek le a transzfúzióra előkészített injekciós üvegből.

A vörösvértesteket minden esetben kémcsövekben 3-4 alkalommal mossuk ki a plazmából úgy, hogy egy térfogat vörösvértesthez 8-10 térfogat izotóniás nátrium-klorid oldatot adunk, majd keverjük és centrifugáljuk 1500-2000 fordulat/perc sebességgel 5-10 percig (amíg teljes eritrocita ülepedés). Minden centrifugálás után a felesleges anyagot leszívjuk.
III. REAKCIÓTECHNIKA

A vizsgált eritrocitákat 5%-os szuszpenzió formájában állítjuk elő, amelyhez egy csepp mosott vörösvértestet négyszer keverünk egy kémcsőben 19 csepp izotóniás nátrium-klorid oldattal.

Egy csepp (0,05 ml) 5%-os eritrocita szuszpenziót egy fehér tányérra visszünk, és megkenjük. A lemezt megrázzuk, és 3 percen belül megfigyeljük, hogy történt-e vörösvértest-agglutináció. Ha agglutináció nem következik be, akkor 1-2 csepp standard szérumot adunk a Coombs-teszthez, a cseppeket alaposan összekeverjük, majd a lemezt enyhén megrázzuk, majd egy-két percig békén hagyjuk és újra felrázzuk. Ezzel egyidejűleg az eredményt 10 percig figyeljük, ami agglutináció jelenlétében vagy hiányában fejeződik ki.
Közvetlen Coombs-teszt eredményeinek értelmezése.

Nincs agglutináció - negatív teszt

Agglutináció jelenléte - pozitív teszt, amely a vizsgált eritrociták szenzibilizációját, azaz az emberi szervezetben (újszülött, beteg) in vivo felszívódását jelzi rajtuk. Ha a vizsgált eritrociták agglutinációja érkezett hozzáadás előtt nekik a Coombs-teszthez szükséges szérumot, a közvetlen teszt eredményét nem veszik figyelembe.
2. Közvetett Coombs-teszt

Az izoantitestek kimutatására szolgál a vizsgált személy vérszérumában

Olyan esetekben alkalmazzák, amikor ki kell deríteni, hogy egy beteg, terhes nő, donor stb. vére tartalmaz-e hiányos izoimmun antitesteket, és meg kell állapítani ezek specifitását. A reakcióhoz a vizsgált személy vérszérumát és ismert specifitású standard eritrocitákat használjuk. A 8-10 vagy több vörösvértest minta között eltéréseket kell mutatni a többi rendszerhez képest, és nagyon fontos, hogy ezen faktorok mindegyike szerepeljen legalább egy eritrocita mintában. A panel Rh-negatív eritrociták mintáit is tartalmazza más rendszerek antigénjeinek különféle kombinációival, így köztük van Duffy-pozitív és Duffy-negatív is, amelyek viszont Kell-pozitívra és Kell-negatívra oszlanak, Kidd-pozitív és Kidd-negatív stb. Negatív kontrollként, ha lehetséges, a reakcióba bevonják annak a személynek a vörösvértesteit, akinek a szérumát vizsgálják.

reakció technikája

Egy állványba több 3-10 ml térfogatú centrifuga vagy egyéb csövet helyeznek el, a reakcióba bevont eritrocita minták számának megfelelően. A kémcsöveket feliratozzuk, és a jelölésnek megfelelően 1 kis csepp (0,01 ml) mosott standard eritrocitát adunk hozzájuk. Minden csőbe három csepp tesztszérumot adunk, a csöveket erőteljesen összerázzuk, hogy az eritrociták összekeveredjenek a szérummal, és 45 percre 37 0 C-os termosztátba helyezzük. Inkubálás után a csöveket eltávolítjuk a termosztátról, és a vörösvértesteket mossuk úgy, hogy izotóniás nátrium-klorid oldatot adunk a cső tetejére, keverjük, majd centrifugáljuk. A mosást 3-4 alkalommal megismételjük, minden alkalommal óvatosan kiszívva a feleslegeset, majd a megmosott eritrocitákhoz 2 csepp izotóniás nátrium-klorid oldatot csepegtetünk, hogy kb. 5%-os szuszpenziót kapjunk (centrifugacsövek használatakor korlátozható a kétszeri mosás) .

Mindegyik csőből 1 csepp 5%-os vörösvértest-szuszpenziót csepegtetünk egy fehér lemezre, 1-2 csepp standard szérumot adunk a Coombs-teszthez, és a szérumot alaposan összekeverjük az eritrocitákkal. A tányért enyhén megrázzuk, majd 1-2 percig magára hagyjuk, és ismételten rendszeresen megrázzuk, miközben 20 percig figyeljük a reakció eredményét.

Az eredmények értelmezése

Nincsenek agglutináció jelei (negatív eredmény) minden mintában azt jelenti, hogy a tesztszérum nem tartalmaz hiányos antitesteket a vizsgálatba bevont standard eritrocitákban található csoportantigénekkel szemben.

Ha a cseppek egy részében vagy a legtöbbben, kivéve a kontrollt, megfigyelt agglutináció , ez azt jelenti, hogy a tesztszérum hiányos vörösvértest-antigének elleni antitesteket tartalmaz. Ezen antitestek specifitásának kérdését a pozitív és negatív reakciók és a reakcióban részt vevő eritrociták antigén szerkezetének összehasonlítása határozza meg. Ezen antitestek aktivitásának kérdését titrálással oldjuk meg.

1. példa Agglutináció minden Rh 0 (D) faktort tartalmazó eritrocita mintánál előfordult, függetlenül a rendszer és más rendszerek egyéb faktorainak meglététől és hiányától, míg az összes Rh 0 (D) - negatív mintánál agglutináció nem volt megfigyelhető (tehát ettől függetlenül egyéb tényezők megléte vagy hiánya) - ez azt jelenti, hogy a tesztszérum hiányos Rhesus elleni antitesteket tartalmaz - Rh 0 (D).

2. példa. Agglutináció minden Duffy-faktort tartalmazó eritrocita mintánál előfordult, függetlenül az Rh-rendszer és más rendszerek antigénjeinek jelenlététől vagy hiányától, míg az összes Duffy-negatív mintánál nem volt megfigyelhető agglutináció, ami azt jelenti, hogy a vizsgált szérum hiányos anti-antitesteket tartalmaz. – Daffy.

Kiegészítés. Abban az esetben, ha az intézmény nem rendelkezik teljes standard vörösvértest-panellel, de szükség van a szérum tesztelésére az antitestek jelenlétére, javasolt egy vizsgálatot végezni 25-30 véletlenszerűen vett vörösvértest mintával, egészséges egyénektől. 0 (I) csoportba tartozó vagy azonos nevű tesztszérummal. Ez lehetővé teszi az Rh-Hr rendszer legtöbb antigénje elleni antitestek jelenlétének vagy hiányának kérdésének megoldását, Duffy, Kell, Kidd.

Pozitív eredmény megérkezése után további következtetést lehet levonni a kimutatott antitestek specificitására vonatkozóan egy speciális vizsgálat során, amely a standard eritrociták teljes paneljével történik.

3. A közvetett Coombs-teszt elvégzésének technikája a transzfundált vér kompatibilitásának vizsgálataként

A vérátömlesztés közbeni inkompatibilitás elkerülése érdekében a következő kompatibilitási teszteket kell elvégezni a transzfúzió előtt:

ABO vércsoport-kompatibilitási teszt, amelyet sima felületen, szobahőmérsékleten végeznek.
Kompatibilitási tesztek Rh-faktorral és más izoantigénekkel.

Az Rh-faktorral és néhány más izoantigénnel való összeférhetetlenség függhet mind a komplett antitestek jelenlététől (37 0 C-os sóoldatban, kémcsövekben meghatározva), mind pedig leggyakrabban a nem komplett antitestektől, amelyekre az indirekt Coombs-teszt a legérzékenyebb.

Egy kis (0,01 ml) csepp mosott donor eritrocitát, amelyet a transzfúzióra szánt vért tartalmazó injekciós üvegből tűn keresztül vettünk, egy centrifuga vagy más 3-4 ml-es cső aljára csepegtetünk, és a beteg szérumából 3 cseppet csepegtetünk azt. A csövet megrázzuk, hogy az eritrociták összekeveredjenek a szérummal, majd termosztátba helyezzük 37 0 C-on 45 percre. Inkubálás után izotóniás nátrium-klorid oldatot adunk a cső tetejére, a cső tartalmát összekeverjük és 5-10 percig centrifugáljuk. Ezt az eritrociták mosását háromszor megismételjük, minden alkalommal óvatosan eltávolítva az infúziót. Centrifugacsövek használatakor két mosásra korlátozódhat. 2 csepp izotóniás nátrium-klorid oldatot adunk a megmosott eritrocitákhoz, hogy körülbelül 5%-os szuszpenziót kapjunk.

1 csepp 5%-os vörösvérsejt-szuszpenziót egy fehér lemezre viszünk, 1-2 csepp Coombs-teszthez használt standard szérumot adunk hozzá, és a szérumot alaposan összekeverjük a vörösvértestekkel. Ezután a tányért enyhén megrázzuk, magára hagyjuk 1-2 percig, majd ismételten megrázzuk, miközben 20 percig figyeljük az eredményt.

Jegyzet: Rh-inkompatibilitás esetén az agglutináció általában az első percben megtörténik, de alacsony Rh-antitest (vagy más antitest) titer esetén az agglutináció később, néha a huszadik percben is bekövetkezhet.
Az eredmény értelmezése:

Agglutinátumok láthatók letisztult vagy teljesen elszíneződött alapon csomók formájában - ez azt jelenti, hogy a donor vére összeegyeztethetetlen a recipiens vérével, és nem transzfundálható.

Hiány Az agglutináció jelei azt jelentik, hogy a páciens vére nem tartalmaz a donor eritrocitáival szembeni hiányos antitesteket az Rh-faktorral és más izoantigénekkel szemben, amelyek ellen inkomplett antitestek képződhetnének.

A közvetett Coombs-teszt csak a hiányos antitestekre érzékeny.
4. Indirekt Coombs-teszt technika az eritrociták antigénszerkezetének meghatározására

Ezt a tesztet bármely eritrocitacsoport-antigén jelenlétének vagy hiányának meghatározására használják standard szérum felhasználásával, amely a megfelelő antitesteket nem teljes formában tartalmazza.

A leggyakrabban használt indirekt Coombs-teszt a Kell (K), Duffy (Fy), Kidd (Jk) antigének, valamint az Rh (Du) rendszer gyenge antigénjének meghatározására szolgál.

Az antigének meghatározásának megkezdése előtt a vizsgált eritrocitákat közvetlen Coombs-teszttel kell tesztelni. Közvetlen teszt - az antigének meghatározása - pozitív eredménye esetén indirekt Coombs-teszt nem végezhető, ehhez más reakciókat kell alkalmazni.

A reakcióhoz 3-4 ml térfogatú centrifugát vagy más kémcsöveket használunk három mennyiségben: egyet a vörösvértestek vizsgálati mintájához és kettőt adunk hozzá 1 kis (0,01 ml) csepp háromszor mosott teszt vörösvértesthez. az első kémcső aljára kontroll eritrocitákat adunk a másodikhoz, amely tartalmazza a kívánt antigént (például Duffy-pozitív), a harmadik kémcsőben pedig egy negatív kontroll (Duffy-negatív). Adjon 2-3 csepp standard szérumot (ebben a példában anti-Duffy) minden csőhöz. A csöveket összerázzuk, hogy a tartalom összekeveredjen, és 37 0 C-os termosztátba helyezzük 45 percre. Ilyen inkubálás után a csöveket kivesszük a termosztátból, a tetejére izotóniás nátrium-klorid oldatot adunk, a tartalmat alaposan összekeverjük és 1500-2000 ezer fordulat/perc sebességgel 5-10 percig centrifugáljuk. A centrifugálás után a felesleges részt óvatosan leszívjuk, és az eritrociták mosását négyszer megismételjük. (Centrifugacsövek használatakor korlátozódhat a kétszeri mosásra).

2 csepp izotóniás nátrium-klorid oldatot adunk a megmosott eritrocitákhoz, hogy körülbelül 5%-os szuszpenziót kapjunk. Mindegyik csőből 1 csepp 5%-os eritrocita szuszpenziót viszünk át egy fehér lemezre, minden csepp vörösvértesthez 1-2 csepp standard szérumot adunk a Coombs-teszthez, és összekeverjük. A tányért enyhén megrázzuk, majd 1-2 percig magára hagyjuk, és ismételt időszakonként megrázzuk, miközben 20 percig figyeljük a reakció lefolyását.
Az eredmények értelmezése

Agglutináció jelenléte eritrociták ( pozitív eredmény) azt jelenti, hogy a vér tartalmazza a kívánt antigént (ebben a példában Duffy-pozitív vér).

Nincs agglutináció (negatív eredmény) azt jelenti, hogy a vizsgált vér nem tartalmazza a kívánt antigént (Duffy-negatív).

Az eredmény a kontrollminták ellenőrzése után számít igaznak, azaz a példában pozitív eredmény Duffy-pozitív mintával és negatív Duffy-negatív mintával.

5. Kiadási űrlap

A reagens folyékony formában 5 vagy 10 ml-es fiolákban kapható (1 ml 10 adagot tartalmaz). A nátrium-azidot tartósítószerként 0,1%-os végső koncentrációban alkalmazzák.

6. Tárolás

Felhasználhatósági időtartam - két év hűtőszekrényben, 2-8 ° C-on. A felbontott flakon hűtőszekrényben, légmentesen lezárva használható zárva a teljes eltarthatósági idő alatt.

A reklamáció okai: tevékenység hiánya, nem specifikusság, a palack sértetlenségének megsértése, pelyhek jelenléte, lejárt reagens. Panasz benyújtásakor kérjük, tüntesse fel az átvétel dátumát, a szállítót (ha az árut más gyártótól kapta), a tételszámot, valamint a reagens alkalmatlanságának okát. Kérjük, csatoljon jegyzőkönyvet a reagensteszt eredményeivel és 2-3 bontatlan reagenspalackkal
Az igényeket a gyártó LLC "MEDIKLON" címére kell küldeni: 127276

- antiglobulin teszt, amelynek célja az Rh-faktorral szembeni hiányos vörösvértest-ellenes antitestek kimutatása Rh-negatív vérben - egy specifikus fehérje, amely az Rh-pozitív vér eritrocitáinak felszínén található. Ennek a tesztnek két típusa van: közvetlen - antitestek kimutatása a vörösvértestek felületén, közvetett - antitestek kimutatása a vérszérumban. Közvetlen vizsgálatot végeznek a vérbetegségek diagnosztizálásában és kezelésében: hemolitikus anémia, újszülött hemolitikus betegsége és mások. Indirekt tesztet végeznek a donor és a recipiens vérének összeegyeztethetőségének felmérésére transzfúzió során, valamint az Rh-konfliktus jelenlétének és kockázatának meghatározására a terhesség tervezése és kezelése során. A Coombs-teszt anyaga vénás vér, a vizsgálatot az agglutinációs reakción alapuló módszerekkel végezzük. Általában mindkét teszt negatív eredményt ad. Az elemzést egy napon belül elvégzik. Összesen 87 olyan cím volt Moszkvában, ahol ezt az elemzést el lehetett végezni.

Coombs teszt - klinikai vizsgálat Rh-negatív vér, amelynek célja az Rh-faktor elleni antitestek kimutatása. A tesztet a Rhesus-konfliktus és a hemolitikus reakciók kialakulásának kockázatának azonosítására használják. Minden emberben az eritrociták felülete tartalmaz egy bizonyos antigén- vagy agglutinogén-készletet - különféle természetű vegyületeket, amelyek jelenlétét vagy hiányát a vércsoport és az Rh-faktor megítélésére használják. Sokféle antigén létezik, az orvosi gyakorlatban a legnagyobb gyakorlati jelentőséggel bír a vércsoportot meghatározó A és B agglutinogén, valamint az Rh faktor D agglutinogén. Pozitív Rh-faktorral a D-antigéneket az eritrociták külső membránján észlelik, negatív - nem.

A Coombs-teszt, amelyet antiglobulin tesztnek is neveznek, az Rh-faktor rendszerrel szembeni hiányos vörösvértest-ellenanyagok kimutatására irányul a vérben. Az Rh-faktor elleni antitestek olyan specifikus immunglobulinok, amelyek az Rh-negatív vérben D-agglutinogént tartalmazó eritrociták bejutásakor képződnek.Ez akkor fordulhat elő, ha a magzat és a terhes nő vére keveredik, előzetes vércsoport-meghatározás nélkül végzett vérátömlesztéssel. A Coombs-teszt két változatban létezik - közvetlen és közvetett. Közvetlen Coombs-teszt végrehajtásakor a vörösvértestek felületéhez kötődő antitesteket mutatnak ki. A vizsgálatot a hemolitikus reakció okának meghatározására használják. A közvetett Coombs-teszt célja az eritrocita elleni antitestek kimutatása a vérplazmában. Meg kell határozni a donor és a recipiens vagy az anya és a magzat vérének kompatibilitását, ez segít megelőzni a Rhesus-konfliktus kialakulását és az azt követő vörösvérsejtek hemolízisét.

A Coombs-teszt mindkét változatához a vért vénából veszik. Az elemzést agglutinációs módszerrel végezzük, antiglobulin szérum felhasználásával. A vizsgálat eredményeit felhasználják a hematológiában a hemolitikus reakciók okainak azonosításában, a sebészetben és a vérátömlesztés alatti újraélesztésben, a szülészet-nőgyógyászatban Rh-negatív vérű nők terhességének monitorozásában.

Javallatok

Különböző eredetű hemolitikus reakciók (vörösvérsejtek pusztulása) esetén írják elő a közvetlen Coombs-tesztet, amely a vörösvértestek felszínéhez kötődő antitesteket detektálja. A vizsgálat primer autoimmun hemolitikus vérszegénység, transzfúzió utáni hemolitikus anémia, újszülött hemolitikus betegsége, autoimmun, daganatos, ill. fertőző betegségek, valamint a fogadás gyógyszerek például kinidin, metildopa, prokainamid. A Rhesus-konfliktus kialakulásának megelőzésére szolgál az indirekt Coombs-teszt, amely a vérplazmában antitesteket mutat ki. Vérátömlesztésre készülő betegek, valamint negatív Rh-faktorral rendelkező terhes nők számára javasolt, feltéve, hogy a gyermek leendő apja pozitív Rh-faktorral rendelkezik.

Az Rh-kompatibilitás meghatározása érdekében a Coombs-tesztet nem adják be Rh-pozitív vérű betegeknek. Ezekben az esetekben már antigének vannak a vörösvértestek felszínén, az antitestek termelődését sem vérátömlesztés, sem magzati vér bejutása nem tudja kiváltani a terhes nő vérkeringésébe. Ezenkívül a vizsgálat nem javasolt terhes nők számára, ha mindkét szülő negatív Rh-faktorral rendelkezik, amely öröklött recesszív tulajdonság. Az ilyen párokban lévő gyereknek mindig van Rh negatív vér, immunológiai konfliktus az anyával lehetetlen. Hemolitikus patológiákban az antiglobulin tesztet nem használják a terápia sikerének ellenőrzésére, mivel az eredmények nem tükrözik az eritrocita pusztulási folyamat aktivitását.

A Coombs-teszt korlátja a kutatási eljárás összetettsége - a megbízható eredmények eléréséhez be kell tartani a hőmérsékleti és időbeli feltételeket, a reagensek és a bioanyag elkészítésének szabályait. A Coombs-teszt előnye a nagy érzékenység. Hemolitikus anémia esetén ennek a tesztnek az eredménye pozitív marad, még akkor is, ha a hemoglobin, a bilirubin és a retikulociták normalizálódnak.

Felkészülés az elemzésre és az anyaggyűjtésre

A Coombs-teszt elvégzésének anyaga vénás vér. A vérvétel idejére és a beteg felkészítésére nincs különösebb követelmény. Mint minden vizsgálatnál, evés után javasolt legalább 4 órás szünetet tartani, az utolsó 30 percben pedig abbahagyni a dohányzást, a fizikai aktivitás kerülje az érzelmi stresszt. Érdemes előre megbeszélni kezelőorvosával a gyógyszerek szedésének abbahagyásának szükségességét – egyes gyógyszerek torzíthatják a Coombs-teszt eredményeit. A vért fecskendővel a cubitalis vénából, ritkábban a kézháti vénából veszik. Néhány órán belül az anyagot a laboratóriumba szállítják.

Közvetlen Coombs-teszt végrehajtásakor antiglobulin szérumot adnak a páciens vérszérumához. Egy idő után a keveréket megvizsgálják az agglutinátok jelenlétére - ezek akkor képződnek, ha antitestek vannak a vörösvértesteken. Pozitív eredmény esetén agglutináló titert határozunk meg. A közvetett Coombs-teszt több lépésből áll. Először is, a szérumban jelenlévő antitesteket az injektált eritrocitákon rögzítik az inkubáció során. Ezután antiglobulin szérumot adunk a mintához, majd egy idő után meghatározzuk az agglutinátok jelenlétét és titerét. Az elemzési időszak 1 nap.

Normális eredmények

Általában a közvetlen Coombs-teszt eredménye negatív (-). Ez azt jelenti, hogy a vérben nincsenek vörösvértestekhez kapcsolódó antitestek, és ezek nem okozhatják a hemolízist. Az indirekt Coombs-teszt normál eredménye is negatív (-), vagyis nincs Rh-faktor elleni antitest a vérplazmában. A recipiens vérátömlesztésére való felkészüléskor ez kompatibilitást jelent a donor vérével, a terhesség figyelemmel kísérése közben - az anya Rh-érzékenységének hiánya, az immunológiai konfliktus kialakulásának alacsony kockázata. Fiziológiai tényezők, mint a táplálkozási szokások ill a fizikai aktivitás, nem befolyásolhatja a teszt eredményét. Ezért, ha az eredmény pozitív, orvosi konzultációra van szükség.

Az elemzés diagnosztikai értéke

A pozitív Coombs-teszt eredményét minőségileg (+)-tól (++++-ig), vagy mennyiségileg 1:16 és 1:256 közötti titerekben fejezik ki. Az eritrocitákon és a vérszérumban lévő antitestek koncentrációjának meghatározását mindkét mintatípusban elvégezzük. A közvetlen Coombs-teszt pozitív eredménye esetén a vörösvértestek külső membránján antitesteket mutatnak ki, amelyek ezeknek a vérsejteknek a pusztulásához vezetnek. Oka lehet előzetes tipizálás nélküli vérátömlesztés - transzfúzió utáni hemolitikus reakció, valamint újszülöttkori eritroblasztózis, gyógyszerhasználat miatti hemolitikus reakció, primer vagy másodlagos autoimmun hemolitikus anémia. A vörösvértestek másodlagos pusztulását okozhatja szisztémás lupus erythematosus, Evans-szindróma, Waldenström-féle makroglobulinémia, paroxizmális hideg hemoglobinuria, krónikus limfoid leukémia, limfóma, fertőző mononucleosis, szifilisz, mycoplasmalis tüdőgyulladás.

Az indirekt Coombs-teszt pozitív eredménye az Rh-faktor elleni antitestek jelenlétét jelzi a plazmában. A gyakorlatban ez azt jelenti, hogy Rh-szenzitizáció történt, a terhesség alatti donorvér infúziója után fennáll a Rh-konfliktus kialakulásának lehetősége. A terhességi szövődmények megelőzése érdekében a pozitív Coombs-teszt eredményes nőket speciális nyilvántartásba veszik.

A normától való eltérések kezelése

A Coombs-teszt izoszerológiai vizsgálatokra vonatkozik. Eredményei lehetővé teszik a hemolitikus reakció azonosítását, valamint a donor és a recipiens, az anya és a magzat vérének kompatibilitásának meghatározását a Rhesus konfliktus kialakulásának megelőzése érdekében. Ha a vizsgálat eredménye pozitív, akkor tanácsot kell kérni a kezelőorvostól - szülész-nőgyógyász, hematológus, sebész.

Tányérra vagy tárgylemezre pipettákkal (különböző!) 1 nagy csepp O (I), A (II), B (III) szérumot. Figyelve az időt, egy tiszta üvegrúddal vagy a tárgylemez tiszta szögével a szérumcseppeket vércseppekkel egyesítik. A meghatározás 5 percig tart, a lemezt felrázzuk, majd minden cseppkeverékhez 1 csepp sóoldatot adunk, és az eredményeket kiértékeljük. Jobb, ha a szérum 2 különböző sorozatból áll. A vércsoport-eredményeknek meg kell egyeznie mindkét szérumsorozatban.

Az izohemagglutináció eredményeinek értékelése:

izohemagglutináció. Pozitív reakció esetén a keverékben összetapadt vörösvértestek apró vörös szemcséi jelennek meg. A szemek nagyobb szemcsékké, az utóbbiak pedig pelyhekké egyesülnek. A szérum szinte elszíneződött;

negatív reakció esetén a keverék 5 perc alatt egyenletes színű marad rózsaszín színés nem találnak szemeket;

ha 3 O(I), A(II), B(III) csoportba tartozó szérummal dolgozunk, 4 reakciókombináció lehetséges:

ha mind a 3 szérum negatív reakciót adott, vagyis a keverék egyenletesen rózsaszínű - ez az O (I) vércsoport;
ha csak az A (II) csoport széruma adott negatív reakciót, és az O (I) és B (III) szérum pozitív reakciót, azaz szemek jelentek meg - ez az A (II) vércsoport;
a B(II) csoport széruma negatív, az O(I) és A(II) csoport széruma pedig pozitív reakciót adott - ez a B(III) vércsoport.

mind a 3 szérum pozitív reakciót adott - az AB (IV) csoport vizsgált vére. Ebben az esetben vizsgálatot végeznek az AB (IV) csoport szérumával.

Jegyzet! A vizsgált vér cseppeinek 5-10-szer kisebbnek kell lenniük, mint a szérum cseppjei.

Isohemagglutinációs hibák.

Nem agglutinál ott, ahol lennie kellene, és ott van agglutináció, ahol nem kellene. Ennek oka lehet az alacsony szérumtiter és a gyenge eritrocita-agglutináció.

Az agglutináció jelenléte ott, ahol nem kellene- ez pszeudoagglutináció, amikor vörösvértestek halmazai "érmeoszlopokat" alkotnak. A tányér ringatása vagy sóoldat hozzáadása tönkreteszi őket.

Panagglutináció, amikor a szérum összeragasztja az összes vörösvérsejtet, beleértve a saját vércsoportját is. Az 5. percre az agglutináció jelei eltűnnek.

Létezik az úgynevezett hideg panagglutináció is, amikor a vörösvértestek összetapadnak a helyiségben lévő alacsony (15 °C alatti) levegő hőmérséklete miatt.

Mindezekben az esetekben vagy ismételt reakciót hajtanak végre, vagy a standard eritrociták szerint.

A vér Rh-tartozásának meghatározása

Az Rh-hovatartozás meghatározására, azaz az Rh-rendszer antigének jelenlétének vagy hiányának kimutatására az emberek vérében standard anti-Rhesus szérumokat (reagenseket) használnak, amelyek specifitásukban eltérőek, azaz antitesteket tartalmaznak a vérben. ennek a rendszernek a különféle antigénjei. Az Rh 0 (D) antigén meghatározására leggyakrabban anti-Rhesus szérumot használnak 10%-os zselatin oldat hozzáadásával, vagy 33%-os poliglucin oldattal előzetesen elkészített standard anti-Rhesus reagenst. A vizsgálat pontosabb eredményeinek megszerzéséhez, valamint más szerológiai rendszerek antigénjeinek kimutatásához a Coombs-tesztet alkalmazzák (nagyon érzékeny a transzfundált vér kompatibilitásának meghatározására is). A vizsgálathoz natív vért vagy valamilyen tartósítószerrel elkészített vért használnak. Ebben az esetben a vért tízszeres térfogatú izotóniás nátrium-klorid oldattal kell lemosni a tartósítószerről. Az Rh-hovatartozás meghatározásakor- Rh 0 (D) két különböző sorozatú szérum vagy anti-Rhesus reagens mintát kell használni, és egyidejűleg Rh-pozitív (Rh +) és Rh-negatív (Rh -) egyének véréből nyert standard eritrocitákat kell használni. ellenőrzésre használható. Más izoantigének meghatározásakor ennek megfelelően a kontroll vörösvértesteket kell használni, amelyek tartalmazzák vagy hiányozzák azt az antigént, amely ellen az antitestek a standard szérumban irányulnak.

Az inkomplett hőagglutininek az antitestek leggyakoribb típusai, amelyek autoimmun hemolitikus anémia kialakulását okozhatják. Ezek az antitestek az IgG-hez, ritkán az IgM-hez, IgA-hoz tartoznak.

COOMBS TESZT

Coombs-teszt: bevezetés. A Coombs-teszt a hemagglutinációs reakción alapuló laboratóriumi diagnosztikai módszer.

Az autoimmun hemolitikus anémia diagnosztizálásának fő módszere a Coombs-teszt. Az immunglobulinokra (különösen az IgG-re) vagy a komplementkomponensekre (különösen a C3-ra) specifikus antitestek azon képességén alapul, hogy agglutinálják az IgG-vel vagy C3-mal bevont eritrocitákat.

Az IgG és a C3b kötődését az eritrocitákhoz autoimmun hemolitikus anémiában és gyógyszer-indukálta immunhemolitikus anémiában figyelték meg. Közvetlen Coombs-teszt. A közvetlen Coombs-teszt a vörösvértestek felületén rögzített antitestek vagy komplement komponensek kimutatására szolgál. Ez a következőképpen történik:

Humán immunglobulinok (antiglobulin szérum) vagy komplement (antikomplementer szérum) elleni antitestek előállításához az állatot humán szérummal, immunglobulinokkal vagy humán komplementtel immunizálják. Az állatból nyert szérumot megtisztítják más fehérjék elleni antitestektől.

A páciens eritrocitáit sóoldattal mossuk, hogy teljesen eltávolítsuk a szérumot, amely semlegesíti az immunglobulinok és a komplement elleni antitesteket, és hamis negatív eredményt okozhat.

Ha antitestek vagy komplement komponensek rögzülnek az eritrociták felszínén, az antiglobulin vagy antikomplementer szérum hozzáadása az eritrociták agglutinációját okozza.

A közvetlen Coombs-tesztet a következő esetekben használják:

autoimmun hemolízis.

Az újszülött hemolitikus betegsége.

Gyógyszer által kiváltott immunhemolitikus anémia.

Hemolitikus transzfúziós reakciók. Közvetett Coombs-teszt. A közvetett Coombs-teszt kimutatja a vörösvértestek elleni antitesteket a szérumban. Ehhez a páciens szérumát 0. csoportba tartozó donor eritrocitákkal inkubálják, majd direkt Coombs-tesztet végeznek.

A közvetett Coombs-tesztet a következő esetekben használják:

A donor és a recipiens vére egyéni összeférhetőségének meghatározása.

Alloantitestek kimutatása, beleértve a hemolitikus transzfúziós reakciókat okozó antitesteket.

Felszíni eritrocita antigének meghatározása az orvosgenetikában és az igazságügyi orvostanban.

Egypetéjű ikrek megerősítése csontvelő-transzplantációban.

A biológiai vizsgálat elvégzéséhez a vért a lehető leggyorsabban át kell juttatni (lehetőleg sugárban). 25 ml vér transzfúziója után a rendszer csövét egy bilinccsel rögzítjük. Ezután 3 perces szünetet tartunk, amely alatt a címzett állapotát figyeljük. A biológiai minta felállításához háromszor 25 ml vért fecskendeznek be. A vizsgálat végén (az első 75 ml vér transzfúziója után, 25 ml-es töredékes adagokban 3 perces időközönként) a rendszert a szükséges transzfúziós sebességre állítják be. Ha egynél több injekciós üveg vért ad át a betegnek, el kell távolítani a tűt a vénából. Ebben az esetben a tűt eltávolítják annak az injekciós üvegnek a kémcsövéből, amelyben a vér kifolyt, és behelyezik a következő injekciós üvegbe. A rendszercső (gumi vagy műanyag) ebben a pillanatban egy bilinccsel van rögzítve. Ha a vérátömlesztés során bármilyen más gyógyszer intravénás beadására van szükség a recipiensnek, ezt úgy kell megtenni, hogy átszúrják a rendszer gumicsövét. A műanyag cső lyukasztása elfogadhatatlan, mivel nem esik le. Minden egyes vérátömlesztés után a beteget ellenőrizni kell a felismerés és az időben történő eltávolítás érdekében lehetséges szövődmények, beleértve allergiás reakciók. A testhőmérsékletet a vérátömlesztés befejezése után 2 órával kell mérni. A mérést a következő 4 órában óránként meg kell ismételni. Ugyanilyen fontos a vizeletürítés és a vizelet összetételének monitorozása, amely lehetővé teszi a toxikus transzfúziót követő reakció jelenlétének megállapítását. A vérátömlesztést követő oliguria és anuria kialakulása, a vérsejtek és a fehérje jelenléte a vizeletben közvetlenül jelzi a transzfúzió utáni hemolízis kialakulását.

Az eritrociták felszínén van nagyszámú antigének. Ezen antigének típusától függően vércsoportokat különböztetnek meg, a legtöbbet vizsgált csoportok az ABO, Rh, Kell, Duffy és még sokan mások.

átlag ár az Ön régiójában: 2645 2645-től 2645-ig

1 labor gyártmány ezt az elemzést a te területeden

Tanulmány leírása

Felkészülés a tanulmányra: Vért vesznek a vénából, majd szérumot (fibrinogén nélküli vérplazmát) nyernek természetes koagulációval vagy fibrinogén kicsapásával. Vizsgált anyag: Vérvétel

Az eritrociták felületén nagyszámú antigén található. Ezen antigének típusától függően vércsoportokat különböztetnek meg, a legtöbbet vizsgált csoport az ABO, Rh, Kell, Duffy és sok más rendszer. Normális esetben más csoport antigénjei ellen is vannak antitestek a vérben, de vérátömlesztés, terhesség, autoimmun betegségés mások, az antigénjeik elleni antitestek kimutathatók.

Módszer

A közvetett Coombs-reakció azon eritrociták agglutinációjának (összetapadásának) kimutatásán alapul, amelyek felületén hiányos antitestek találhatók, ami antiglobulin szérum hozzáadásakor jelenik meg.

Az első szakaszban a donor eritrocitákat (O(I) csoport, Rh+) és a tesztszérumot egy kémcsőbe adják. Ha a vizsgált szérumban hiányos vörösvértest-ellenanyagok vannak jelen, akkor ezek a donor eritrociták felületén rögzülnek.

A második szakaszban az üvegre antitestekkel rendelkező donor eritrocitákat (ha van ilyen) és standard antiglobulin szérumot humán immunglobulinok elleni antitestekkel visszük fel. Ha az első szakaszban az eritrociták elleni antitestek rögzítve vannak a vörösvértestek felületén, akkor standard szérum hozzáadásakor az eritrociták az antitestek kölcsönhatása miatt összetapadnak.

Referenciaértékek - norma
(Indirekt Coombs-reakció (antiglobulin teszt, hiányos vörösvértest-ellenes antitestek kimutatása), vér)

Az indikátorok referenciaértékeire vonatkozó információk, valamint az elemzésbe bevont indikátorok összetétele laboratóriumonként kissé eltérhet!

Norma:

Normális esetben nem szabad ellenanyagnak lennie a saját vörösvértestek ellen, a Coombs-reakció beállításakor nem történik vörösvértest-aggregáció.

Javallatok

A humorális specifikus immunitás vizsgálata feltételezett autoimmun reakciók esetén a szervezetben, az anya és a magzat közötti Rh-konfliktus, a donor és a recipiens vére kompatibilitásának meghatározása