कोम्ब्स का टेस्ट पॉजिटिव है क्या। एंटीग्लोबुलिन परीक्षण

कूम्ब्स परीक्षण एक विधि है प्रयोगशाला अनुसंधानरक्तगुल्म को प्रभावित करके बनाया गया है। यह इम्युनोग्लोबुलिन और एंजाइम तत्वों के प्रति एंटीबॉडी की संवेदनशीलता के साथ-साथ C3 या Lg के साथ लेपित एरिथ्रोसाइट्स को एग्लूटीनेट करने की उनकी क्षमता पर आधारित है।

Coombs का प्रत्यक्ष निदान

कोशिकाओं के बाहर से स्थापित एंटीबॉडी या पूरक घटकों का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाता है। डायरेक्ट कॉम्ब्स टेस्ट निम्नलिखित चरणों द्वारा किया जाता है।

ऐसे नमूने का आवेदन

Direct Coombs का निदान कुछ मामलों में किया जाता है, जैसे:

आधान प्रभाव;
ऑटोइम्यून हेमोलिसिस;
दवा प्रेरित हेमोलिटिक एनीमिया।

अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण

यह निदान सीरम में कोशिकाओं के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाना संभव बनाता है, जो एक नियम के रूप में, दाता प्रकार 0 एरिथ्रोसाइट्स के साथ ऊष्मायन किया जाता है, और फिर एक सीधा नमूना किया जाता है। Coombs के अप्रत्यक्ष निदान का उपयोग निम्नलिखित मामलों में किया जाता है:

विश्लेषण की तैयारी कैसे करें

सर्वेक्षण की तैयारी के लिए कुछ नियम हैं।

यदि रोगी नवजात है, तो माता-पिता को यह जानने की जरूरत है कि परीक्षण एचपीएन (नवजात शिशु की हेमोलिटिक बीमारी) का निदान करने में मदद करेगा।
यदि रोगी को हेमोलिटिक एनीमिया का संदेह है, तो उसे समझाया जाना चाहिए कि विश्लेषण उसे यह पता लगाने की अनुमति देगा कि क्या यह सुरक्षात्मक विकारों, दवाओं या अन्य कारकों के कारण है।
Coombs का प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष परीक्षण कोई आहार या आहार प्रतिबंध नहीं लगाता है।
रोगी को यह सूचित करना आवश्यक है कि परीक्षा के लिए शिरा से रक्त लेना आवश्यक होगा, और उसे यह भी बताएं कि वेनिपंक्चर कब किया जाएगा।
संभावना के बारे में चेतावनी देने वाली एक और बात अप्रिय संवेदनाएंहाथ पर पट्टी लगाने की अवधि और प्रक्रिया के दौरान ही।
नमूना परिणाम को प्रभावित करने वाली दवाओं को बंद कर दिया जाना चाहिए।

इन दवाओं में शामिल हैं:

"स्ट्रेप्टोमाइसिन";
"मेथिल्डोपा";
"प्रोकेनामाइड";
सल्फोनामाइड्स;
मेलफ़लान;
क्विनिडाइन;
रिफैम्पिन;
आइसोनियाज़िड;
सेफलोस्पोरिन;
हाइड्रैलाज़िन;
क्लोरप्रोमाज़िन;
लेवोडोपा;
"टेट्रासाइक्लिन";
"डिपेनिलहाइडेंटोइन";
"एटोसुक्सिमाइड";
"पेनिसिलिन";
मेफ़ानामिक एसिड।

सुबह खाली पेट ब्लड सैंपलिंग की जाती है।

आयोजन कैसे होता है

Coombs परीक्षण इस क्रम में किया जाता है:

वेनिपंक्चर के बाद एक वयस्क रोगी में निदान करते समय, रक्त को EDTA (एथिलीनडायमाइन टेट्रासेटेट) के साथ ट्यूबों में ले जाया जाता है।
नवजात शिशु को गर्भनाल से EDTA युक्त बीकर में खींचा जाता है।
पंचर क्षेत्र दबाया जाता है सूती पोंछाजब तक खून बहना बंद न हो जाए।
जब वेनिपंक्चर साइट पर एक खरोंच दिखाई देता है, तो वार्मिंग कंप्रेस निर्धारित किए जाते हैं।
रक्त एकत्र करने के बाद, रोगी को उत्कृष्ट दवाएं लेने के लिए वापस जाने की अनुमति दी जाती है।
नवजात शिशु के माता-पिता को सूचित करना आवश्यक है कि एनीमिया की गतिशीलता की निगरानी के लिए एक माध्यमिक विश्लेषण की आवश्यकता हो सकती है।

Coombs परीक्षण के लाभ

इस तरह के शोध के कुछ फायदे हैं, अर्थात्:

विश्लेषण के विपक्ष

सकारात्मक कॉम्ब्स परीक्षण एक अपेक्षाकृत श्रमसाध्य परीक्षा पद्धति है जो प्रदर्शन की एक विशिष्ट सटीकता मानती है। इसका उपयोग करते समय, विशेष रूप से कमजोर सकारात्मक प्रभावों की व्याख्या से जुड़ी कुछ कठिनाइयों का सामना करना पड़ सकता है।

यह स्थापित किया गया है कि कोम्ब्स के नमूनों के उत्पादन के दौरान गलत नकारात्मक या कमजोर सकारात्मक प्रतिक्रियाएं कोशिकाओं के असंतोषजनक रूप से सक्रिय धुलाई, सीरम अवशेषों के साथ एंटीग्लोबुलिन अभिकर्मक के कमजोर होने के साथ-साथ एक गैर-फैटी सतह वाले यौगिकों के परिणाम हो सकते हैं। जो एंटीग्लोबुलिन को ठीक किया जा सकता है, जिससे इसकी प्रभावशीलता कम हो जाती है।

Coombs का परीक्षण एक और दोष से अलग है - एंटीग्लोबुलिन अभिकर्मक की कम स्थिरता, जिसके अधिग्रहण और संरक्षण में व्यक्तिगत विशेषताएं हैं, जो इसी तरह रक्तगुल्म पर एंटीग्लोबुलिन सीरम के प्रभाव का संख्यात्मक रूप से मूल्यांकन करना मुश्किल बनाता है।

शोध से पता चल सकने वाले रोग

Coombs का निदान कुछ प्रकार की बीमारियों का पता लगाना संभव बनाता है, जैसे:

नवजात शिशुओं की हेमोलिटिक अस्वस्थता;
विभिन्न आधान प्रतिक्रियाएं;
ऑटोइम्यून हेमोलिसिस;
औषधीय हेमोलिटिक एनीमिया।

आज, Coombs परीक्षण को एक वयस्क और नवजात शिशु दोनों के लिए काफी लोकप्रिय रक्त परीक्षण प्रणाली माना जाता है। इससे कई अलग-अलग बीमारियों की पहचान करना संभव हो जाता है।

Roszdravnadzor . के आदेश से स्वीकृत

"मानव रक्त की आरएच प्रणाली के एंटीजन और एंटीबॉडी के निर्धारण के लिए अभिकर्मकों के सेट" के उपयोग पर
(कूम्ब्स परीक्षण के लिए एजीएस)

टीयू 9398-102-51203590-2012

आरयू नंबर आरजेडएन 2013/1255 दिनांक 11.10.2013

I. प्रस्तावना

Coombs के परीक्षण के लिए मानक सीरम में मानव रक्त प्रोटीन के खिलाफ विशिष्ट हेटेरोइम्यून एंटीबॉडी होते हैं और दो प्रतिक्रिया रूपों में उपयोग के लिए अभिप्रेत है - प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण।

डायरेक्ट कॉम्ब्स टेस्टनवजात शिशुओं के हेमोलिटिक रोग में विवो में एरिथ्रोसाइट्स के संवेदीकरण को निर्धारित करने के लिए और क्रोनिक के ऑटोइम्यून रूप वाले रोगियों में उपयोग किया जाता है हीमोलिटिक अरक्ततासाथ ही कुछ अन्य स्थितियों में। डायरेक्ट कॉम्ब्स टेस्टइस तथ्य में शामिल हैं कि कोम्ब्स के परीक्षण के लिए सीरम को अध्ययन के तहत एरिथ्रोसाइट्स में जोड़ा जाता है, जो पहले अपने स्वयं के प्लाज्मा के प्रोटीन से धोए गए थे। यदि विवो में एरिथ्रोसाइट्स को संवेदनशील बनाया गया है, तो प्रतिक्रिया के परिणामस्वरूप, उनका एग्लूटीनेशन होता है।

अप्रत्यक्ष नमूनाकूम्ब्सइसका उपयोग शरीर के संवेदीकरण की स्थिति का पता लगाने के लिए एक परीक्षण के रूप में किया जाता है, जिससे जांच किए गए व्यक्ति के रक्त सीरम में एक मुक्त अवस्था में एंटीबॉडी का पता लगाना संभव हो जाता है; ट्रांसफ्यूज्ड रक्त की अनुकूलता के लिए एक परीक्षण के रूप में, जब इच्छित दाता के एरिथ्रोसाइट्स पर प्राप्तकर्ता के सीरम के प्रभाव की जांच की जाती है; और ज्ञात विशिष्टता के एंटीबॉडी युक्त मानक सीरा के प्रारंभिक जोखिम द्वारा एरिथ्रोसाइट्स में विभिन्न समूह एंटीजन के निर्धारण के लिए एक परीक्षण के रूप में। अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण (सभी प्रकार) प्रस्तुतदो चरणों में, जिनमें से पहला मानक (या परीक्षण) एरिथ्रोसाइट्स के साथ परीक्षण (या मानक) सीरम का ऊष्मायन है, यानी विट्रो में एरिथ्रोसाइट्स का संवेदीकरण। दूसरा चरण कॉम्ब्स के परीक्षण के लिए सीरम के साथ वास्तविक प्रतिक्रिया है, जो उसी तरह से उत्पन्न होता है जैसे कि प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण।

Coombs के परीक्षण के लिए प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष दोनों तरह की प्रतिक्रिया का अंतिम परिणाम एरिथ्रोसाइट्स पर तय एंटीबॉडी (मानव रक्त प्रोटीन) के साथ Coombs परीक्षण के लिए मानक सीरम की बातचीत के कारण होता है। यह परिणाम एरिथ्रोसाइट एग्लूटीनेशन के रूप में प्रकट होता है। एग्लूटिनेशन का निरीक्षण करने के लिए, एक गीली सतह के साथ एक सफेद चीनी मिट्टी के बरतन या किसी भी सफेद प्लेट का उपयोग किया जाना चाहिए ताकि उस पर लागू बूंदों को अच्छी तरह मिश्रित किया जा सके और प्लेट की सतह पर फैल न जाए। मिली-जुली बूंदों को एक प्लेट पर हल्के से फैलाना चाहिए, लगभग 2-कोपेक सिक्के के आकार तक।
द्वितीय. प्रतिक्रिया सामग्री की तैयारी

इसमें एंटीबॉडी की उपस्थिति और विशिष्टता को निर्धारित करने के लिए परीक्षण सीरम एक परिरक्षक के अतिरिक्त के बिना जांच किए गए व्यक्ति के रक्त से प्राप्त किया जाता है। + 4–8 0 के तापमान पर 2 दिनों से अधिक या जमे हुए अवस्था में स्टोर करें - 1 महीने की अवधि के लिए।

एक संगतता परीक्षण के लिए सीरम उसी तरह प्राप्त किया जाता है, लेकिन इसका उपयोग 2 दिनों से अधिक के शेल्फ जीवन के साथ नहीं किया जाता है।

एरिथ्रोसाइट्स, उनमें कुछ आइसोएन्जेन्स के निर्धारण के उद्देश्य से, उस व्यक्ति से किसी प्रकार के संरक्षक के साथ काटा जाता है जिसके रक्त की जांच की जा रही है। आप परिरक्षक के बिना लिए गए रक्त से लाल रक्त कोशिकाओं के एक अवक्षेप का भी उपयोग कर सकते हैं।

अनुकूलता के लिए परीक्षण करते समय, दाता के रक्त का उपयोग किया जाता है, आधान के लिए तैयार शीशी से सुई के माध्यम से हवा निकाल दी जाती है।

सभी मामलों में, एरिथ्रोसाइट्स की एक मात्रा में आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान के 8-10 संस्करणों को जोड़कर प्लाज्मा से टेस्ट ट्यूबों में एरिथ्रोसाइट्स को 3-4 बार धोया जाता है, इसके बाद 5-10 मिनट के लिए 1500-2000 आरपीएम पर मिश्रण और सेंट्रीफ्यूजेशन किया जाता है। एरिथ्रोसाइट्स का पूर्ण अवसादन)। प्रत्येक केंद्रापसारक के बाद, सतह पर तैरनेवाला चूसा जाता है।
III. प्रतिक्रियाओं के संचालन की तकनीक

परीक्षण एरिथ्रोसाइट्स 5% निलंबन के रूप में तैयार किए जाते हैं, जिसके लिए चार धुले हुए एरिथ्रोसाइट्स की एक बूंद को आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान की 19 बूंदों के साथ एक परखनली में मिलाया जाता है।

एरिथ्रोसाइट्स के 5% निलंबन की एक बूंद (0.05 मिली) को एक सफेद प्लेट में स्थानांतरित किया जाता है और स्मियर किया जाता है। प्लेट हिल जाती है और 3 मिनट के लिए यह देखा जाता है कि क्या एरिथ्रोसाइट्स का एग्लूटिनेशन हुआ है। यदि एग्लूटिनेशन नहीं होता है, तो यहां कॉम्ब्स टेस्ट के लिए मानक सीरम की 1-2 बूंदें डाली जाती हैं, बूंदों को अच्छी तरह मिलाया जाता है, जिसके बाद प्लेट को थोड़ा हिलाया जाता है, फिर एक या दो मिनट के लिए अकेला छोड़ दिया जाता है और फिर से हिलाया जाता है। उसी समय, परिणाम की निगरानी 10 मिनट के लिए की जाती है, जो एग्लूटिनेशन की उपस्थिति या अनुपस्थिति में व्यक्त की जाती है।
प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण के परिणामों की व्याख्या।

एग्लूटिनेशन की कमी - नकारात्मक नमूना

एग्लूटिनेशन की उपस्थिति - एक सकारात्मक परीक्षण, जो अध्ययन किए गए एरिथ्रोसाइट्स के संवेदीकरण को इंगित करता है, यानी, उन पर एंटीबॉडी का अवशोषण, जो मानव शरीर (नवजात शिशु, रोगी) में विवो में हुआ था। यदि अध्ययन के तहत एरिथ्रोसाइट्स का एग्लूटीनेशन जोड़ने से पहले आयाकॉम्ब्स के परीक्षण के लिए सीरम, प्रत्यक्ष नमूने के परिणाम को ध्यान में नहीं रखा जाता है।
2. अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण

जांच किए गए व्यक्ति के रक्त सीरम में आइसोएंटीबॉडी का पता लगाने के लिए बनाया गया है

इसका उपयोग उन मामलों में किया जाता है जहां यह पता लगाना आवश्यक है कि क्या रोगी, गर्भवती महिला, दाता आदि के रक्त में अपूर्ण आइसोइम्यून एंटीबॉडी हैं और उनकी विशिष्टता स्थापित करने के लिए। प्रतिक्रिया के लिए, जांच किए गए व्यक्ति के रक्त सीरम और ज्ञात विशिष्टता के मानक एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग किया जाता है। इन 8-10 या अधिक लाल रक्त कोशिकाओं के नमूनों में, अन्य प्रणालियों के कारकों में अंतर होना चाहिए, और यह बहुत महत्वपूर्ण है कि इनमें से प्रत्येक कारक कम से कम एक लाल रक्त कोशिका के नमूने में निहित हो। पैनल में अन्य प्रणालियों से एंटीजन के विभिन्न संयोजनों के साथ आरएच-नकारात्मक एरिथ्रोसाइट्स के नमूने भी शामिल हैं, ताकि उनमें से डफी-पॉजिटिव और डफी-नेगेटिव हों, जो बदले में, केल-पॉजिटिव और केल-नेगेटिव में विभाजित हो जाएंगे। किड-पॉजिटिव और किड-नेगेटिव आदि। प्रतिक्रिया में एक नकारात्मक नियंत्रण के रूप में, यदि संभव हो तो, उस व्यक्ति के एरिथ्रोसाइट्स को शामिल करें जिसके सीरम की जांच की जा रही है।

प्रतिक्रिया तकनीक

प्रतिक्रिया में शामिल एरिथ्रोसाइट नमूनों की संख्या के अनुसार, 3-10 मिलीलीटर की मात्रा के साथ कई अपकेंद्रित्र या अन्य ट्यूबों को एक रैक में रखा जाता है। ट्यूबों को चिह्नित किया जाता है और, अंकन के अनुसार, धोए गए मानक एरिथ्रोसाइट्स की 1 छोटी बूंद (0.01 मिली) उनमें डाली जाती है। प्रत्येक ट्यूब में परीक्षण सीरम की तीन बूंदें डाली जाती हैं, सीरम के साथ एरिथ्रोसाइट्स को मिलाने के लिए ट्यूबों को जोर से हिलाया जाता है और 45 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टेट में रखा जाता है। ऊष्मायन के बाद, ट्यूबों को थर्मोस्टेट से हटा दिया जाता है, और एरिथ्रोसाइट्स को ट्यूब के शीर्ष पर आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान जोड़कर धोया जाता है, सरगर्मी और बाद में सेंट्रीफ्यूजेशन। धोने को 3-4 बार दोहराया जाता है, हर बार ध्यान से नादस्टॉय को चूसते हुए, फिर लगभग 5% निलंबन प्राप्त करने के लिए धुले हुए एरिथ्रोसाइट्स में आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान की 2 बूंदें डाली जाती हैं (अपकेंद्रित्र ट्यूबों का उपयोग करते समय, आप खुद को दो बार धोने तक सीमित कर सकते हैं) .

प्रत्येक ट्यूब से एरिथ्रोसाइट्स के 5% निलंबन की 1 बूंद को एक सफेद प्लेट में स्थानांतरित किया जाता है, कॉम्ब्स के परीक्षण के लिए मानक सीरम की 1-2 बूंदों को वहां जोड़ा जाता है और सीरम को एरिथ्रोसाइट्स के साथ अच्छी तरह मिलाया जाता है। प्लेट को थोड़ा हिलाया जाता है, फिर 1-2 मिनट के लिए अकेला छोड़ दिया जाता है और फिर से समय-समय पर हिलाया जाता है, जबकि प्रतिक्रिया के परिणाम को 20 मिनट तक देखा जाता है।

परिणामों की व्याख्या

एग्लूटिनेशन का कोई संकेत नहीं (नकारात्मक परिणाम) सभी नमूनों में इसका मतलब है कि परीक्षण किए गए सीरम में समूह एंटीजन के लिए अपूर्ण एंटीबॉडी नहीं हैं, जो अध्ययन में शामिल मानक एरिथ्रोसाइट्स में निहित हैं।

यदि नियंत्रण के अलावा कुछ या अधिकतर बूंदों में, देखे गए भागों का जुड़ना इसका मतलब है कि अध्ययन किए गए सीरम में एरिथ्रोसाइट्स के एंटीजन के खिलाफ अपूर्ण एंटीबॉडी होते हैं। इन एंटीबॉडी की विशिष्टता का प्रश्न प्रतिक्रिया में शामिल एरिथ्रोसाइट्स की एंटीजेनिक संरचना के साथ सकारात्मक और नकारात्मक प्रतिक्रियाओं की तुलना करके तय किया जाता है। इन एंटीबॉडी की गतिविधि का प्रश्न अनुमापन द्वारा तय किया जाता है।

उदाहरण 1।इस प्रणाली और अन्य प्रणालियों के अन्य कारकों की उपस्थिति और अनुपस्थिति की परवाह किए बिना, आरएच 0 (डी) कारक वाले सभी एरिथ्रोसाइट नमूनों के साथ एग्लूटीनेशन हुआ, जबकि सभी आरएच 0 (डी) - नकारात्मक नमूनों के साथ कोई एग्लूटिनेशन नहीं देखा गया था (इसलिए हालांकि , अन्य कारकों की उपस्थिति या अनुपस्थिति की परवाह किए बिना) - इसका मतलब है कि अध्ययन किए गए सीरम में अपूर्ण एंटी-रीसस एंटीबॉडी हैं - आरएच 0 (डी)।

उदाहरण 2... आरएच प्रणाली और अन्य प्रणालियों के एंटीजन की उपस्थिति या अनुपस्थिति की परवाह किए बिना, डफी कारक वाले सभी एरिथ्रोसाइट नमूनों के साथ एग्लूटीनेशन हुआ, जबकि सभी डफी-नकारात्मक नमूनों के साथ एग्लूटिनेशन नहीं देखा गया था, जिसका अर्थ है कि अध्ययन किए गए सीरम में अपूर्ण एंटीबॉडी हैं - डफी।

योग।यदि संस्थान में मानक एरिथ्रोसाइट्स का एक पूरा पैनल नहीं है, लेकिन एंटीबॉडी की उपस्थिति के लिए सीरम का अध्ययन करने की आवश्यकता है, तो समूह 0 के स्वस्थ व्यक्तियों से एरिथ्रोसाइट्स के यादृच्छिक रूप से लिए गए 25-30 नमूनों के साथ एक अध्ययन करने की सिफारिश की जाती है। I) या परीक्षण सीरम के साथ एक ही नाम का सीरम। इससे Rh-Hr प्रणाली के अधिकांश एंटीजन, डफी, केल, किड में एंटीबॉडी की उपस्थिति या अनुपस्थिति के मुद्दे को हल करना संभव हो जाएगा।

यदि एक सकारात्मक परिणाम प्राप्त होता है, तो पहचाने गए एंटीबॉडी की विशिष्टता के बारे में एक और निष्कर्ष मानक एरिथ्रोसाइट्स के एक पूर्ण पैनल के साथ एक विशेष अध्ययन द्वारा तय किया जा सकता है।

3. ट्रांसफ्यूज्ड रक्त की अनुकूलता के परीक्षण के रूप में अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण करने की तकनीक

रक्त आधान के साथ असंगति को रोकने के लिए, आधान से पहले निम्नलिखित संगतता परीक्षण किए जाने चाहिए:

एबीओ रक्त समूह संगतता परीक्षण, जो कमरे के तापमान पर एक विमान पर किया जाता है।
आरएच कारक और अन्य आइसोएंटिजेन्स के लिए संगतता परीक्षण।

आरएच कारक और कुछ अन्य आइसोएंटिजेन्स के लिए असंगति पूर्ण एंटीबॉडी की उपस्थिति (परीक्षण ट्यूबों में 37 डिग्री सेल्सियस पर खारा माध्यम में निर्धारित) और, अक्सर, अपूर्ण एंटीबॉडी पर निर्भर हो सकती है, जिसके लिए अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण है। सबसे संवेदनशील।

आधान के लिए रक्त के साथ एक शीशी से एक सुई के माध्यम से धोए गए दाता एरिथ्रोसाइट्स की एक छोटी (0.01 मिली) बूंद को 3-4 मिलीलीटर की मात्रा के साथ एक अपकेंद्रित्र या अन्य ट्यूब के नीचे स्थानांतरित किया जाता है और रोगी के सीरम की 3 बूंदों को जोड़ा जाता है। इसके लिए। सीरम के साथ एरिथ्रोसाइट्स को मिलाने के लिए टेस्ट ट्यूब को हिलाया जाता है, और फिर थर्मोस्टेट में 37 डिग्री सेल्सियस पर 45 मिनट के लिए रखा जाता है। ऊष्मायन के बाद, आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान ट्यूब के शीर्ष पर जोड़ा जाता है, ट्यूब की सामग्री मिश्रित होती है और 5-10 मिनट के लिए अपकेंद्रित्र होती है। एरिथ्रोसाइट्स की यह धुलाई 3 बार दोहराई जाती है, हर बार ध्यान से नादस्टॉय को हटाते हुए। अपकेंद्रित्र ट्यूबों का उपयोग करते समय, आप अपने आप को दो बार धोने तक सीमित कर सकते हैं। धुले हुए एरिथ्रोसाइट्स में लगभग 5% निलंबन प्राप्त करने के लिए आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान की 2 बूंदें मिलाएं।

एरिथ्रोसाइट्स के 5% निलंबन की 1 बूंद को एक सफेद प्लेट में स्थानांतरित किया जाता है, कॉम्ब्स के परीक्षण के लिए मानक सीरम की 1-2 बूंदों को वहां जोड़ा जाता है और सीरम को एरिथ्रोसाइट्स के साथ अच्छी तरह मिलाया जाता है। फिर प्लेट को थोड़ा हिलाया जाता है, 1-2 मिनट के लिए अकेला छोड़ दिया जाता है और फिर से समय-समय पर हिलाया जाता है, जबकि परिणाम 20 मिनट तक देखा जाता है।

ध्यान दें:आरएच कारक के लिए असंगति के साथ, एग्लूटिनेशन आमतौर पर पहले मिनट के भीतर होता है, हालांकि, आरएच एंटीबॉडी (या अन्य एंटीबॉडी) के कम टिटर के साथ, एग्लूटिनेशन बाद में हो सकता है, कभी-कभी बीसवें मिनट तक।
परिणाम की व्याख्या:

एग्लूटीनेट दिखाई दे रहे हैं एक प्रबुद्ध या पूरी तरह से फीका पड़ा हुआ पृष्ठभूमि पर गांठ के रूप में - इसका मतलब है कि दाता का रक्त असंगतप्राप्तकर्ता के रक्त के साथ और आधान नहीं किया जा सकता है।

अनुपस्थिति एग्लूटिनेशन के संकेतों का अर्थ है कि रोगी के रक्त में आरएच कारक और अन्य आइसोएंटीजन के संबंध में दाता के एरिथ्रोसाइट्स के लिए अपूर्ण एंटीबॉडी नहीं होते हैं, जिससे अपूर्ण एंटीबॉडी बन सकते थे।

अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण केवल अपूर्ण एंटीबॉडी के लिए संवेदनशील है।
4. एरिथ्रोसाइट्स की एंटीजेनिक संरचना का निर्धारण करने के लिए तकनीक अप्रत्यक्ष Coombs का परीक्षण

इस परीक्षण का उपयोग अपूर्ण रूप में संबंधित एंटीबॉडी युक्त मानक सीरम का उपयोग करके एरिथ्रोसाइट्स के किसी भी समूह एंटीजन की उपस्थिति या अनुपस्थिति को निर्धारित करने के लिए किया जाता है।

सबसे अधिक बार, अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण का उपयोग केल (K), डफी (Fy), किड (Jk) प्रतिजनों को निर्धारित करने के लिए किया जाता है, और कमजोर Rh प्रतिजन (Du) को निर्धारित करने के लिए भी किया जाता है।

एंटीजन के निर्धारण के साथ आगे बढ़ने से पहले, जांच के तहत एरिथ्रोसाइट्स को सीधे कॉम्ब्स परीक्षण में जांचा जाना चाहिए। यदि प्रत्यक्ष परीक्षण का परिणाम सकारात्मक है, तो अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण द्वारा प्रतिजनों का निर्धारण नहीं किया जा सकता है और इस उद्देश्य के लिए अन्य प्रतिक्रियाओं का उपयोग किया जाना चाहिए।

प्रतिक्रिया के लिए, तीन की मात्रा में 3-4 मिलीलीटर की मात्रा के साथ अपकेंद्रित्र या अन्य ट्यूबों का उपयोग किया जाता है: एक - एरिथ्रोसाइट्स के परीक्षण नमूने के लिए और दो पहली टेस्ट ट्यूब के नीचे के लिए, 1 छोटा (0.01 मिलीलीटर) बूंद तीन बार धोया गया परीक्षण एरिथ्रोसाइट्स जोड़ा जाता है, दूसरे में - नियंत्रण एरिथ्रोसाइट्स, जिसमें वांछित एंटीजन होता है (उदाहरण के लिए, डफी पॉजिटिव) और तीसरी ट्यूब में - एक नकारात्मक नियंत्रण (डफी - नकारात्मक)। सभी ट्यूबों में मानक सीरम की 2-3 बूंदें मिलाएं (इस उदाहरण में एंटी-डफी)। सामग्री को मिलाने के लिए ट्यूबों को हिलाया जाता है और 45 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टेट में रखा जाता है। इस तरह के ऊष्मायन के बाद, ट्यूबों को थर्मोस्टैट से हटा दिया जाता है, आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान शीर्ष पर जोड़ा जाता है, सामग्री को अच्छी तरह से मिश्रित किया जाता है और 5-10 मिनट के लिए 1500-2000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, नादस्टॉय को सावधानीपूर्वक एस्पिरेटेड किया जाता है और एरिथ्रोसाइट्स की यह धुलाई 4 बार दोहराई जाती है। (अपकेंद्रित्र ट्यूबों का उपयोग करते समय, आप अपने आप को दो बार धोने तक सीमित कर सकते हैं)।

धुले हुए एरिथ्रोसाइट्स में लगभग 5% निलंबन प्राप्त करने के लिए आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान की 2 बूंदें मिलाएं। प्रत्येक ट्यूब से एरिथ्रोसाइट्स के 5% निलंबन की 1 बूंद को एक सफेद प्लेट में स्थानांतरित किया जाता है, कॉम्ब्स परीक्षण के लिए मानक सीरम की 1-2 बूंदों को एरिथ्रोसाइट्स की प्रत्येक बूंद में मिलाया जाता है और मिश्रित किया जाता है। प्लेट को थोड़ा हिलाया जाता है, फिर 1-2 मिनट के लिए अकेला छोड़ दिया जाता है और फिर से समय-समय पर हिलाया जाता है, जबकि 20 मिनट तक प्रतिक्रिया की प्रगति को देखते हुए।
परिणामों की व्याख्या

एग्लूटिनेशन की उपस्थिति एरिथ्रोसाइट्स ( सकारात्मक परिणाम) का अर्थ है कि रक्त में वांछित प्रतिजन है (इस उदाहरण में, डफी का रक्त सकारात्मक है)।

एग्लूटिनेशन की कमी (नकारात्मक) का अर्थ है कि परीक्षण किए जा रहे रक्त में वांछित प्रतिजन (डफी निगेटिव) नहीं है।

नियंत्रण नमूनों की जांच के बाद परिणाम को सही माना जाता है, उदाहरण में, डफी-पॉजिटिव नमूने के साथ सकारात्मक परिणाम और डफी-नकारात्मक नमूने के साथ नकारात्मक।

5. रिलीज फॉर्म

अभिकर्मक तरल रूप में 5 या 10 मिलीलीटर शीशियों (1 मिलीलीटर में 10 खुराक होते हैं) में उत्पादित होता है। सोडियम एजाइड 0.1% की अंतिम सांद्रता पर परिरक्षक के रूप में प्रयोग किया जाता है।

6. भंडारण

रेफ्रिजरेटर में 2-8 डिग्री सेल्सियस पर शेल्फ जीवन दो साल है। खुली हुई बोतल उपयोग के लिए उपयुक्त है यदि इसे एक एयरटाइट में रेफ्रिजरेटर में संग्रहीत किया जाता है बंद रूपपूरे शेल्फ जीवन में।

शिकायत के आधार हैं: गतिविधि की कमी, गैर-विशिष्टता, शीशी की अखंडता का उल्लंघन, गुच्छे की उपस्थिति, समाप्त अभिकर्मक शेल्फ जीवन। शिकायत दर्ज करते समय, कृपया प्राप्ति की तारीख, आपूर्तिकर्ता (यदि आपको माल निर्माता से नहीं प्राप्त हुआ है), बैच संख्या, अभिकर्मक को अनुपयुक्त घोषित किए जाने के कारण बताएं। कृपया अभिकर्मक जांच के परिणामों और 2-3 बंद अभिकर्मक शीशियों के साथ एक प्रोटोकॉल संलग्न करें
निर्माता मेडिकलॉन एलएलसी को शिकायतें भेजी जानी चाहिए: 127276

- एंटीग्लोबुलिन परीक्षण, आरएच कारक के लिए अपूर्ण एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी का पता लगाने के उद्देश्य से - एक विशिष्ट प्रोटीन जो आरएच-नकारात्मक रक्त में आरएच-पॉजिटिव एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर स्थित होता है। इस परीक्षण के दो प्रकार हैं: प्रत्यक्ष - एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर एंटीबॉडी का पता लगाना, अप्रत्यक्ष - रक्त सीरम में एंटीबॉडी का पता लगाना। रक्त रोगों के उपचार के निदान और निगरानी में एक सीधा नमूना किया जाता है: हेमोलिटिक एनीमिया, नवजात शिशुओं के हेमोलिटिक रोग और अन्य। आधान के दौरान दाता और प्राप्तकर्ता के रक्त की अनुकूलता का आकलन करने के साथ-साथ गर्भावस्था की योजना और प्रबंधन में आरएच-संघर्ष की उपस्थिति और जोखिम का निर्धारण करने के लिए एक अप्रत्यक्ष परीक्षण किया जाता है। कॉम्ब्स परीक्षण के लिए सामग्री शिरापरक रक्त है अध्ययन एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया के आधार पर विधियों द्वारा किया जाता है। आम तौर पर, दोनों नमूने नकारात्मक होते हैं। विश्लेषण एक दिन के भीतर किया जाता है। मास्को में कुल 87 पते पाए गए जहां आप यह विश्लेषण कर सकते हैं।

कॉम्ब्स का परीक्षण - नैदानिक अनुसंधानआरएच नकारात्मक रक्त, आरएच कारक के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाने के उद्देश्य से। परीक्षण का उपयोग आरएच-संघर्ष और हेमोलिटिक प्रतिक्रियाओं के विकास के जोखिम की पहचान करने के लिए किया जाता है। प्रत्येक व्यक्ति में, एरिथ्रोसाइट्स की सतह में एंटीजन या एग्लूटीनोजेन का एक निश्चित सेट होता है - एक अलग प्रकृति के यौगिक, जिसकी उपस्थिति या अनुपस्थिति का उपयोग रक्त समूह और आरएच कारक का न्याय करने के लिए किया जाता है। एंटीजन कई प्रकार के होते हैं; चिकित्सा पद्धति में, एग्लूटीनोजेन्स ए और बी, जो रक्त समूह का निर्धारण करते हैं, और एग्लूटीनोजन डी, आरएच कारक, सबसे बड़े व्यावहारिक महत्व के हैं। एरिथ्रोसाइट्स की बाहरी झिल्ली पर एक सकारात्मक आरएच कारक के साथ, डी एंटीजन निर्धारित होते हैं, एक नकारात्मक के साथ - नहीं।

Coombs परीक्षण, जिसे एंटीग्लोबुलिन परीक्षण भी कहा जाता है, का उद्देश्य रक्त में Rh कारक प्रणाली में अपूर्ण एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी का पता लगाना है। आरएच कारक के लिए एंटीबॉडी विशिष्ट इम्युनोग्लोबुलिन होते हैं जो आरएच-नकारात्मक रक्त में उत्पन्न होते हैं जब एग्लूटीनोजेन्स डी के साथ एरिथ्रोसाइट्स इसमें प्रवेश करते हैं। यह तब हो सकता है जब एक भ्रूण और एक गर्भवती महिला का रक्त मिलाया जाता है, बिना प्रारंभिक रक्त टाइपिंग के किए गए रक्त आधान के दौरान। कॉम्ब्स का परीक्षण दो संस्करणों में आता है - प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष। प्रत्यक्ष Coombs परीक्षण करते समय, लाल रक्त कोशिकाओं की सतह से जुड़े एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है। अध्ययन का उपयोग हेमोलिटिक प्रतिक्रिया के कारण को स्थापित करने के लिए किया जाता है। अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण का उद्देश्य रक्त प्लाज्मा में एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी का पता लगाना है। दाता और प्राप्तकर्ता या मां और भ्रूण के रक्त की संगतता निर्धारित करना आवश्यक है, यह आरएच-संघर्ष के विकास और एरिथ्रोसाइट्स के बाद के हेमोलिसिस को रोकने में मदद करता है।

Coombs परीक्षण के दोनों प्रकारों के लिए रक्त एक नस से लिया जाता है। विश्लेषण एंटीग्लोबुलिन सीरम का उपयोग करके एग्लूटीनेशन विधि द्वारा किया जाता है। अध्ययन के परिणामों का उपयोग हेमटोलॉजी में हेमोलिटिक प्रतिक्रियाओं के कारणों की पहचान करने के लिए किया जाता है, रक्त आधान के दौरान सर्जरी और पुनर्जीवन में, प्रसूति और स्त्री रोग में जब आरएच-नकारात्मक रक्त वाली महिलाओं में गर्भधारण की निगरानी होती है।

संकेत

प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण, जो लाल रक्त कोशिकाओं की सतह से जुड़ी एंटीबॉडी का पता लगाता है, विभिन्न मूल के हेमोलिटिक प्रतिक्रियाओं (लाल रक्त कोशिकाओं का विनाश) के लिए निर्धारित है। अध्ययन प्राथमिक ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया, पोस्ट-ट्रांसफ्यूजन हेमोलिटिक एनीमिया, नवजात शिशु के हेमोलिटिक रोग, ऑटोइम्यून, ट्यूमर या के कारण एरिथ्रोसाइट्स के हेमोलिसिस के लिए संकेत दिया गया है। संक्रामक रोगसाथ ही रिसेप्शन दवाई, उदाहरण के लिए, क्विनिडाइन, मेथिल्डोपा, प्रोकेनामाइड। अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण, जो रक्त प्लाज्मा में एंटीबॉडी का पता लगाता है, का उपयोग Rh-संघर्ष के विकास को रोकने के लिए किया जाता है। यह रोगियों के लिए रक्त आधान की तैयारी के साथ-साथ एक नकारात्मक आरएच कारक वाली गर्भवती महिलाओं के लिए संकेत दिया जाता है, बशर्ते कि बच्चे के भावी पिता के पास सकारात्मक आरएच कारक हो।

Rh अनुकूलता निर्धारित करने के उद्देश्य से, Rh-पॉजिटिव रक्त वाले रोगियों के लिए Coombs परीक्षण निर्धारित नहीं है। इन मामलों में, एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर पहले से ही एंटीजन होते हैं, एंटीबॉडी का उत्पादन रक्त आधान या गर्भवती महिला के रक्तप्रवाह में भ्रूण के रक्त के प्रवेश से शुरू नहीं हो सकता है। इसके अलावा, गर्भवती महिलाओं के लिए अध्ययन का संकेत नहीं दिया गया है यदि माता-पिता दोनों में नकारात्मक आरएच कारक है - एक विरासत में मिला हुआ पुनरावर्ती गुण। ऐसे जोड़े में एक बच्चा हमेशा होता है आरएच नकारात्मक रक्त, मां के साथ एक प्रतिरक्षाविज्ञानी संघर्ष असंभव है। हेमोलिटिक विकृतियों में, चिकित्सा की सफलता की निगरानी के लिए एंटीग्लोबुलिन परीक्षण का उपयोग नहीं किया जाता है, क्योंकि परिणाम एरिथ्रोसाइट विनाश प्रक्रिया की गतिविधि को प्रतिबिंबित नहीं करते हैं।

Coombs परीक्षण की सीमा अनुसंधान प्रक्रिया की श्रमसाध्यता है - विश्वसनीय परिणाम प्राप्त करने के लिए, तापमान और समय व्यवस्था, अभिकर्मकों और बायोमैटिरियल्स तैयार करने के नियमों का पालन करना आवश्यक है। कॉम्ब्स परीक्षण के लाभों में इसकी उच्च संवेदनशीलता शामिल है। हेमोलिटिक एनीमिया में, इस परीक्षण के परिणाम सकारात्मक रहते हैं, भले ही हीमोग्लोबिन, बिलीरुबिन और रेटिकुलोसाइट्स के पैरामीटर सामान्य हो जाएं।

सामग्री के विश्लेषण और नमूने की तैयारी

Coombs परीक्षण करने के लिए सामग्री शिरापरक रक्त है। रक्त के नमूने की प्रक्रिया के समय और रोगी की तैयारी के लिए कोई विशेष आवश्यकता नहीं है। जैसा कि किसी भी अध्ययन के साथ होता है, खाने के बाद कम से कम 4 घंटे और धूम्रपान बंद करने के लिए अंतिम 30 मिनट में ब्रेक लेने की सलाह दी जाती है। शारीरिक गतिविधिभावनात्मक तनाव से बचें। दवा लेने से रोकने की आवश्यकता के बारे में पहले से अपने डॉक्टर से चर्चा करना भी उचित है - कुछ दवाएं कॉम्ब्स परीक्षण के परिणामों को विकृत कर सकती हैं। रक्त को उलनार नस से एक सिरिंज के साथ लिया जाता है, कम बार हाथ के पीछे की नस से। कुछ घंटों के भीतर, सामग्री को प्रयोगशाला में पहुंचा दिया जाता है।

डायरेक्ट कॉम्ब्स टेस्ट में, रोगी के सीरम में एंटीग्लोबुलिन सीरम मिलाया जाता है। थोड़ी देर के बाद, एग्लूटीनेट की उपस्थिति के लिए मिश्रण की जांच की जाती है - एरिथ्रोसाइट्स पर एंटीबॉडी होने पर वे बनते हैं। यदि परिणाम सकारात्मक है, तो एग्लूटीनेटिंग टिटर निर्धारित किया जाता है। अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण में अधिक चरण होते हैं। सबसे पहले, सीरम में एंटीबॉडी ऊष्मायन के दौरान इंजेक्शन एरिथ्रोसाइट्स पर तय किए जाते हैं। फिर नमूने में एंटीग्लोबुलिन सीरम मिलाया जाता है, थोड़ी देर बाद एग्लूटीनेट की उपस्थिति और अनुमापांक निर्धारित किया जाता है। विश्लेषण समयरेखा 1 दिन है।

सामान्य परिणाम

सामान्य प्रत्यक्ष कॉम्ब्स का परीक्षा परिणाम नकारात्मक (-) है। इसका मतलब है कि लाल रक्त कोशिकाओं से जुड़े रक्त में कोई एंटीबॉडी नहीं हैं, और वे हेमोलिसिस का कारण नहीं बन सकते हैं। अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण का सामान्य परिणाम भी नकारात्मक (-) होता है, अर्थात रक्त प्लाज्मा में Rh कारक के लिए कोई एंटीबॉडी नहीं होते हैं। प्राप्तकर्ता के लिए रक्त आधान की तैयारी करते समय, इसका अर्थ है दाता के रक्त के साथ संगतता, गर्भावस्था की निगरानी करते समय - मां के आरएच संवेदीकरण की अनुपस्थिति, एक प्रतिरक्षाविज्ञानी संघर्ष के विकास का कम जोखिम। शारीरिक कारक जैसे आहार संबंधी आदतें या शारीरिक गतिविधि, परीक्षा परिणाम को प्रभावित नहीं कर सकता। इसलिए, यदि परिणाम सकारात्मक है, तो डॉक्टर का परामर्श आवश्यक है।

विश्लेषण का नैदानिक मूल्य

एक सकारात्मक Coombs परीक्षा परिणाम गुणात्मक रूप से (+) से (++++) तक, या मात्रात्मक रूप से, 1:16 से 1: 256 तक टाइटर्स के रूप में व्यक्त किया जाता है। एरिथ्रोसाइट्स और रक्त सीरम में एंटीबॉडी की एकाग्रता का निर्धारण दोनों प्रकार के नमूनों में किया जाता है। यदि प्रत्यक्ष Coombs परीक्षण सकारात्मक है, तो लाल रक्त कोशिकाओं के बाहरी झिल्ली पर एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है, जो इन रक्त कोशिकाओं के विनाश का कारण बनता है। इसका कारण प्रारंभिक टाइपिंग के बिना रक्त आधान हो सकता है - पोस्ट-ट्रांसफ्यूजन हेमोलिटिक प्रतिक्रिया, साथ ही नवजात शिशु के एरिथ्रोब्लास्टोसिस, दवाओं के उपयोग के कारण हेमोलिटिक प्रतिक्रिया, प्राथमिक या माध्यमिक ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया। लाल रक्त कोशिकाओं का द्वितीयक विनाश प्रणालीगत ल्यूपस एरिथेमेटोसस, इवांस सिंड्रोम, वाल्डेनस्ट्रॉम के मैक्रोग्लोबुलिनमिया, पैरॉक्सिस्मल कोल्ड हीमोग्लोबिनुरिया, क्रोनिक लिम्फोसाइटिक ल्यूकेमिया, लिम्फोमा, संक्रामक मोनोन्यूक्लिओसिस, सिफलिस, माइकोप्लाज्मा निमोनिया के कारण हो सकता है।

एक सकारात्मक अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण प्लाज्मा में Rh कारक के प्रति एंटीबॉडी की उपस्थिति को इंगित करता है। व्यवहार में, इसका मतलब है कि आरएच संवेदीकरण हुआ है, गर्भावस्था के दौरान, दाता रक्त के जलसेक के बाद आरएच संघर्ष के विकास की संभावना है। गर्भावस्था की जटिलताओं को रोकने के लिए, सकारात्मक Coombs परीक्षण के परिणाम वाली महिलाओं को पंजीकृत किया जाता है।

आदर्श से विचलन का उपचार

Coombs का परीक्षण आइसोसरोलॉजिकल अध्ययन को संदर्भित करता है। इसके परिणाम आरएच-संघर्ष के विकास को रोकने के लिए, हेमोलिटिक प्रतिक्रिया की पहचान करना, साथ ही दाता और प्राप्तकर्ता, मां और भ्रूण के रक्त की संगतता का निर्धारण करना संभव बनाते हैं। यदि परीक्षण का परिणाम सकारात्मक है, तो उपस्थित चिकित्सक - प्रसूति-स्त्री रोग विशेषज्ञ, हेमटोलॉजिस्ट, सर्जन से सलाह लेना आवश्यक है।

सीरम ओ (आई), ए (द्वितीय), बी (III) की 1 बड़ी बूंद के लिए एक प्लेट या कांच की स्लाइड पर पिपेट (अलग!) के साथ लगाया जाता है। समय को ध्यान में रखते हुए, सीरम की बूंदों को एक साफ कांच की छड़ या कांच की स्लाइड के एक साफ कोण के साथ रक्त की बूंदों के साथ जोड़ा जाता है। निर्धारण 5 मिनट तक रहता है, प्लेट को हिलाता है, फिर बूंदों के प्रत्येक मिश्रण में खारा की 1 बूंद डाली जाती है और परिणामों का मूल्यांकन किया जाता है। सीरम 2 अलग-अलग श्रंखलाओं में हो तो बेहतर है। रक्त समूह के परिणाम दोनों सीरम बैचों में मेल खाना चाहिए।

आइसोहेमाग्लगुटिनेशन के परिणामों का मूल्यांकन:

आइसोहेमग्लूटिनेशन। एक सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, मिश्रण में चिपके हुए एरिथ्रोसाइट्स के छोटे लाल दाने दिखाई देते हैं। दाने बड़े अनाज में विलीन हो जाते हैं, और बाद वाले गुच्छे में। सीरम लगभग फीका पड़ा हुआ है;

एक नकारात्मक प्रतिक्रिया के मामले में, मिश्रण समान रूप से रंगीन रहता है गुलाबी रंगऔर कोई अनाज नहीं मिला;

O (I), A (II), B (III) समूहों के 3 सीरा के साथ काम करते समय, प्रतिक्रियाओं के 4 संयोजन संभव हैं:

यदि सभी 3 सेरा ने नकारात्मक प्रतिक्रिया दी, अर्थात, मिश्रण समान रूप से गुलाबी रंग का है - यह O (I) रक्त समूह है;
यदि समूह ए (द्वितीय) के केवल सीरम ने नकारात्मक प्रतिक्रिया दी, और सीरम ओ (आई) और बी (III) ने सकारात्मक प्रतिक्रिया दी, यानी अनाज दिखाई दिया - यह ए (द्वितीय) रक्त समूह है;
समूह बी (द्वितीय) के सीरम ने नकारात्मक प्रतिक्रिया दी, और समूह ओ (आई) और ए (द्वितीय) के सीरम ने सकारात्मक दिया - यह बी (III) रक्त समूह है।

सभी 3 सेरा ने सकारात्मक प्रतिक्रियाएं दीं - एबी (चतुर्थ) समूह का परीक्षण किया गया रक्त। इस मामले में, सीरम एबी (चतुर्थ) समूह के साथ एक अध्ययन किया जाता है।

ध्यान दें!जांच की जाने वाली रक्त की बूंदें सीरम की बूंदों से 5-10 गुना छोटी होनी चाहिए।

आइसोहेमग्लूटिनेशन की त्रुटियां।

एग्लूटिनेशन करने में विफलता, जहां यह होना चाहिए और एग्लूटिनेशन की उपस्थिति, जहां यह नहीं होना चाहिए। यह कमजोर सीरम टिटर और लाल रक्त कोशिकाओं के खराब एग्लूटीनेशन के साथ हो सकता है।

एग्लूटिनेशन की उपस्थिति, जहां यह नहीं होना चाहिए- यह छद्म समूहन है, जब लाल रक्त कोशिकाओं के ढेर "सिक्का स्तंभ" बनाते हैं। थाली को हिलाने या सेलाइन मिलाने से वे नष्ट हो जाएंगे।

Panagglutination, जब सीरम अपने स्वयं के रक्त समूह सहित सभी लाल रक्त कोशिकाओं को एक साथ चिपका देता है। 5वें मिनट तक, एग्लूटिनेशन के लक्षण गायब हो जाते हैं।

तथाकथित ठंडा पैनाग्लूटिनेशन भी होता है, जब कमरे में कम हवा के तापमान (15 डिग्री सेल्सियस से नीचे) के कारण एरिथ्रोसाइट्स का आसंजन होता है।

इन सभी मामलों में, या तो दोहराई गई प्रतिक्रिया या मानक एरिथ्रोसाइट्स किया जाता है।

रक्त के आरएच-संबद्धता का निर्धारण

आरएच-संबद्धता का निर्धारण करने के लिए, अर्थात, लोगों के रक्त में आरएच प्रणाली के एंटीजन की उपस्थिति या अनुपस्थिति की पहचान करने के लिए, मानक एंटी-आरएच सेरा (अभिकर्मकों) का उपयोग किया जाता है, जो विशिष्टता में भिन्न होते हैं, अर्थात, विभिन्न के संबंध में एंटीबॉडी युक्त होते हैं। इस प्रणाली के एंटीजन। Rh 0 (D) प्रतिजन का निर्धारण करने के लिए, एंटी-रीसस सीरम का उपयोग अक्सर 10% जिलेटिन घोल के साथ किया जाता है या 33% पॉलीग्लुसीन समाधान के साथ पहले से तैयार एक मानक एंटी-रीसस अभिकर्मक का उपयोग किया जाता है। अधिक सटीक शोध परिणाम प्राप्त करने के लिए, साथ ही साथ अन्य सीरोलॉजिकल सिस्टम के एंटीजन का पता लगाने के लिए, कॉम्ब्स टेस्ट का उपयोग किया जाता है (यह ट्रांसफ्यूज्ड रक्त की संगतता का निर्धारण करने में भी बहुत संवेदनशील है)। शोध के लिए, रक्त का उपयोग देशी या किसी प्रकार के परिरक्षक के साथ किया जाता है। इस मामले में, रक्त को परिरक्षक से आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान की दस गुना मात्रा से धोया जाना चाहिए। आरएच-संबद्धता का निर्धारण करते समय- Rh 0 (D), सीरम के दो नमूने या दो अलग-अलग श्रृंखला के एंटी-आरएच अभिकर्मक का उपयोग किया जाना चाहिए और साथ ही Rh-पॉजिटिव (Rh +) और Rh-negative (Rh -) व्यक्तियों के रक्त से प्राप्त मानक एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग किया जाना चाहिए। नियंत्रण के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए। अन्य आइसोएंटिजेन्स का निर्धारण करते समय, नियंत्रण एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग किया जाना चाहिए, जिसमें एंटीजन होता है या नहीं होता है जिसके खिलाफ एंटीबॉडी को मानक सीरम में निर्देशित किया जाता है।

अपूर्ण गर्म एग्लूटीनिन सबसे सामान्य प्रकार के एंटीबॉडी हैं जो ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया के विकास का कारण बन सकते हैं। ये एंटीबॉडी आईजीजी हैं, शायद ही कभी आईजीएम, आईजीए।

कॉम्ब्स नमूना

कॉम्ब्स का परीक्षण: एक परिचय। Coombs' परीक्षण एक प्रयोगशाला निदान पद्धति है जो रक्तगुल्म प्रतिक्रिया पर आधारित है।

ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया के निदान के लिए मुख्य विधि Coombs परीक्षण है। यह इम्युनोग्लोबुलिन (विशेष रूप से आईजीजी) या पूरक घटकों (विशेष रूप से सी 3) के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी की क्षमता पर आधारित है जो आईजीजी या सी 3 के साथ लेपित एरिथ्रोसाइट्स को एग्लूटीनेट करता है।

एरिथ्रोसाइट्स के लिए IgG और C3b का बंधन ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया और ड्रग इम्यून हेमोलिटिक एनीमिया में देखा जाता है। डायरेक्ट कॉम्ब्स टेस्ट।प्रत्यक्ष Coombs परीक्षण का उपयोग लाल रक्त कोशिकाओं की सतह पर तय एंटीबॉडी या पूरक घटकों का पता लगाने के लिए किया जाता है। इसे निम्नानुसार किया जाता है:

मानव इम्युनोग्लोबुलिन (एंटीग्लोबुलिन सीरम) या पूरक (एंटी-पूरक सीरम) के लिए एंटीबॉडी प्राप्त करने के लिए, जानवर को मानव सीरम, इम्युनोग्लोबुलिन या मानव पूरक के साथ प्रतिरक्षित किया जाता है। पशु से प्राप्त सीरम को एंटीबॉडी से अन्य प्रोटीनों में शुद्ध किया जाता है।

सीरम को पूरी तरह से हटाने के लिए रोगी के एरिथ्रोसाइट्स को खारा से धोया जाता है, जो इम्युनोग्लोबुलिन और पूरक के लिए एंटीबॉडी को बेअसर करता है और एक गलत नकारात्मक परिणाम पैदा कर सकता है।

यदि लाल रक्त कोशिकाओं की सतह पर एंटीबॉडी या पूरक घटक तय किए जाते हैं, तो एंटीग्लोबुलिन या एंटी-पूरक सीरम के अतिरिक्त लाल रक्त कोशिकाओं के समूहन का कारण बनता है।

निम्नलिखित मामलों में प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण का उपयोग किया जाता है:

ऑटोइम्यून हेमोलिसिस।

नवजात शिशु के हेमोलिटिक रोग।

औषधीय प्रतिरक्षा हेमोलिटिक एनीमिया।

हेमोलिटिक आधान प्रतिक्रियाएं। अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण।अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण सीरम में लाल रक्त कोशिकाओं के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाता है। इसके लिए, रोगी के सीरम को ग्रुप 0 के डोनर एरिथ्रोसाइट्स से इनक्यूबेट किया जाता है, और फिर एक सीधा कॉम्ब्स टेस्ट किया जाता है।

अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण निम्नलिखित मामलों में प्रयोग किया जाता है:

दाता और प्राप्तकर्ता रक्त की व्यक्तिगत अनुकूलता का निर्धारण।

एलोएंटिबॉडी का पता लगाना, जिसमें एंटीबॉडी भी शामिल हैं जो हेमोलिटिक ट्रांसफ्यूजन प्रतिक्रियाओं का कारण बनते हैं।

मेडिकल जेनेटिक्स और फोरेंसिक मेडिसिन में एरिथ्रोसाइट सरफेस एंटीजन का निर्धारण।

अस्थि मज्जा प्रत्यारोपण में समान जुड़वां की पुष्टि।

एक जैविक नमूने का संचालन करने के लिए, जितनी जल्दी हो सके रक्त आधान किया जाता है (अधिमानतः एक जेट में)। 25 मिलीलीटर रक्त चढ़ाने के बाद, सिस्टम ट्यूब को एक क्लैंप से जकड़ दिया जाता है। फिर 3 मिनट के लिए विराम दिया जाता है, जिसके दौरान प्राप्तकर्ता की स्थिति की निगरानी की जाती है। एक जैविक नमूना स्थापित करने के लिए, 25 मिलीलीटर रक्त को तीन बार इंजेक्ट किया जाता है।परीक्षण के अंत में (3 मिनट के अंतराल पर 25 मिलीलीटर की आंशिक खुराक में पहले 75 मिलीलीटर रक्त को आधान करने के बाद), सिस्टम को आवश्यक आधान दर में समायोजित किया जाता है। रोगी को एक बोतल से अधिक रक्त चढ़ाते समय नस से सुई निकालना आवश्यक होता है। इस मामले में, सुई को बोतल की परखनली से निकाल दिया जाता है जिसमें खून निकल चुका होता है और अगली बोतल में डाला जाता है। सिस्टम ट्यूब (रबर या प्लास्टिक) को इस समय एक क्लैंप से जकड़ा जाता है। यदि रक्त आधान के दौरान प्राप्तकर्ता को किसी अन्य दवा के अंतःशिरा प्रशासन की आवश्यकता होती है, तो यह सिस्टम की रबर ट्यूब को छेदकर किया जाता है। प्लास्टिक टयूबिंग के पंचर अस्वीकार्य हैं, क्योंकि वे ढहते नहीं हैं। प्रत्येक रक्त आधान के बाद, रोगी को पहचानने और समय पर समाप्त करने के लिए निगरानी की जानी चाहिए संभावित जटिलताएं, समेत एलर्जी... रक्त आधान समाप्त होने के 2 घंटे बाद शरीर का तापमान मापा जाना चाहिए। बढ़ते समय इसके माप को अगले 4 घंटे में हर घंटे दोहराना चाहिए। पेशाब और मूत्र की संरचना का अवलोकन कम महत्व का नहीं है, जो एक विषाक्त पोस्ट-ट्रांसफ्यूजन प्रतिक्रिया की उपस्थिति को स्थापित करना संभव बनाता है। रक्त आधान के बाद ओलिगुरिया और औरिया की शुरुआत, मूत्र में रक्त कोशिकाओं और प्रोटीन की उपस्थिति पोस्ट-ट्रांसफ्यूजन हेमोलिसिस के विकास का प्रत्यक्ष संकेत है।

एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर है एक बड़ी संख्या कीप्रतिजन। इन एंटीजन के प्रकार के आधार पर, रक्त समूहों को प्रतिष्ठित किया जाता है, सबसे अधिक अध्ययन किए गए समूह एबीओ, आरएच, केल, डफी और कई अन्य हैं ...

औसत मूल्यआपके क्षेत्र में: 2645 2645... से 2645 . तक

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अध्ययन विवरण

शोध की तैयारी:रक्त एक नस से लिया जाता है, और फिर सीरम (फाइब्रिनोजेन के बिना रक्त प्लाज्मा) प्राकृतिक थक्के द्वारा या फाइब्रिनोजेन की वर्षा द्वारा प्राप्त किया जाता है। अध्ययन सामग्री:खून लेना

एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर बड़ी संख्या में एंटीजन होते हैं। इन एंटीजन के प्रकार के आधार पर, रक्त समूहों को प्रतिष्ठित किया जाता है, सबसे अधिक अध्ययन किए गए समूह एबीओ, आरएच, केल, डफी और कई अन्य प्रणालियां हैं। आम तौर पर, रक्त में दूसरे समूह के प्रतिजनों के प्रति एंटीबॉडी होते हैं, लेकिन रक्त आधान के साथ, गर्भावस्था, स्व - प्रतिरक्षित रोगआदि, उनके प्रतिजनों के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है। एरिथ्रोसाइट्स के लिए अपूर्ण एंटीबॉडी

तरीका

अप्रत्यक्ष Coombs प्रतिक्रिया एरिथ्रोसाइट्स के एग्लूटीनेशन (आसंजन) का पता लगाने पर आधारित है, जिसमें सतह पर अपूर्ण एंटीबॉडी होते हैं, जो एंटीग्लोबुलिन सीरम जोड़ने पर प्रकट होता है।

पहले चरण में, दाता एरिथ्रोसाइट्स (ओ (आई) समूह, आरएच +) और परीक्षण सीरम को एक ट्यूब में पेश किया जाता है। यदि अध्ययन किए गए सीरम में एरिथ्रोसाइट्स के लिए अपूर्ण एंटीबॉडी मौजूद हैं, तो वे दाता एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर तय हो जाते हैं।

दूसरे चरण में, एंटीबॉडी के साथ दाता एरिथ्रोसाइट्स (यदि कोई हो) और मानव इम्युनोग्लोबुलिन के एंटीबॉडी के साथ मानक एंटीग्लोबुलिन सीरम कांच पर लागू होते हैं। यदि पहले चरण में एरिथ्रोसाइट्स की एंटीबॉडी एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर तय की जाती हैं, तो जब मानक सीरम जोड़ा जाता है, तो एंटीबॉडी की बातचीत के कारण एरिथ्रोसाइट्स एक साथ चिपक जाते हैं।

संदर्भ मान - मानदंड
(अप्रत्यक्ष Coombs प्रतिक्रिया (एंटीग्लोबुलिन परीक्षण, अपूर्ण एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी का पता लगाना), रक्त)

संकेतकों के संदर्भ मूल्यों के साथ-साथ विश्लेषण में शामिल संकेतकों की संरचना के बारे में जानकारी प्रयोगशाला के आधार पर थोड़ी भिन्न हो सकती है!

सामान्य:

आम तौर पर, अपने स्वयं के एरिथ्रोसाइट्स में एंटीबॉडी नहीं होनी चाहिए; जब कॉम्ब्स प्रतिक्रिया का मंचन किया जाता है, तो एरिथ्रोसाइट्स का एकत्रीकरण नहीं होता है।

संकेत

शरीर में ऑटोइम्यून प्रतिक्रियाओं के संदेह के मामले में हास्य विशिष्ट प्रतिरक्षा का अध्ययन, मां और भ्रूण के बीच आरएच-संघर्ष, दाता और प्राप्तकर्ता रक्त की अनुकूलता का निर्धारण