Metódy mikrobiologickej diagnostiky vírusových ochorení. Metódy izolácie a identifikácie vírusov
119. Sérologické testy používané na diagnostiku vírusových infekcií.
Detekcia v krvnom sére protilátky pacienta proti antigénom patogénu vám umožňujú stanoviť diagnózu ochorenia. Sérologické štúdie sa využívajú aj na identifikáciu mikrobiálnych antigénov, rôznych biologicky aktívnych látok, krvných skupín, tkanivových a nádorových antigénov, imunitných komplexov, bunkových receptorov atď.
Pri izolácii mikróba od pacienta sa patogén identifikuje štúdiom jeho antigénnych vlastností pomocou imunodiagnostických sér, teda krvných sér hyperimunizovaných zvierat obsahujúcich špecifické protilátky. Tento tzv sérologická identifikácia mikroorganizmy.
Široko používaný v mikrobiológii a imunológii aglutinácia, precipitácia, neutralizačné reakcie, reakcie zahŕňajúce komplement, s použitím značených protilátok a antigénov (rádioimunologické, enzýmové imunostanovenie, imunofluorescenčné metódy). Uvedené reakcie sa líšia v registrovanom účinku a technike stagingu, všetky sú však založené na reakcii interakcie antigénu s protilátkou a používajú sa na detekciu protilátok aj antigénov. Imunitné reakcie sa vyznačujú vysokou citlivosťou a špecifickosťou.
Vlastnosti interakcie protilátky s antigénom sú základom diagnostických reakcií v laboratóriách. Reakcia in vitro medzi antigénom a protilátkou pozostáva zo špecifickej a nešpecifickej fázy. V špecifická fáza dochádza k rýchlej špecifickej väzbe aktívneho miesta protilátky na determinant antigénu. Potom príde nešpecifická fáza - pomalšie, čo sa prejavuje viditeľnými fyzikálnymi javmi, napríklad tvorbou vločiek (aglutinačný jav) alebo zrazeninami vo forme zákalu. Táto fáza vyžaduje určité podmienky (elektrolyty, optimálne pH média).
Väzba antigénneho determinantu (epitopu) na aktívne miesto protilátkového Fab fragmentu je spôsobená van der Waalsovými silami, vodíkovými väzbami a hydrofóbnymi interakciami. Sila a množstvo antigénu viazaného protilátkami závisí od afinity, avidity protilátok a ich valencie.
Na otázku o expresnej diagnostike:
1. Dá sa diagnostikovať kultúra izolovaná vo svojej čistej forme. 2. V špeciálne vybavených laboratóriách (musí mať povolenie) 3. Dodržiavanie prísnych pravidiel ako: izolovaná miestnosť, vyžadované špeciálne ochranné obleky, povinná úplná sanitácia priestorov po práci s patogénom, sanitácia výskumníkov po práci. Metódy expresnej diagnostiky. 1. Bakteriológia - kombinované polytropné živné pôdy pre rýchle štúdium morfov, tinktorov, biochem. vlastnosti. Použitie enzýmovej indikátorovej pásky, elektrofyzikálna metóda, metóda papierových diskov impregnovaných rôznymi látkami (glukazo, laktóza atď.) 2. Fágová diagnostika. 3. Sérodiagnostika - Manciniho metóda, precipitačná reakcia v géli podľa Ascoliho, RA, RPGA. 4. Bakterioskopia - priama a nepriama RIF. Expresné diagnostické metódy pre: Cholera - MZ Ermolyeva, okres imobilizácie s cholerovým diagnostickým sérom, RIF. Tularémia - RA na skle, RPHA Chume - fágová typizácia, metóda sacharidových papierových diskov, RPHA. Anthrax - Ascoli metóda, RIF, RPGA. Povaha rastu: existujú tri difúzne (nepovinné anaeróby), pri dne (obligátne anaeróby) a povrchové (povinné anaeróby).
Izolácia čistej kultúry anaeróbnych baktérií
V laboratórnej praxi je často potrebné pracovať s anaeróbnymi mikroorganizmami. Sú náročnejšie na živné pôdy ako aeróby, často potrebujú špeciálne rastové doplnky, pri pestovaní vyžadujú zastavenie prísunu kyslíka, ich rast je dlhší. Preto je práca s nimi komplikovanejšia a vyžaduje si značnú pozornosť bakteriológov a laborantov.
Je dôležité chrániť materiál, ktorý obsahuje anaeróbne patogény, pred toxickými účinkami vzdušného kyslíka. Preto sa odporúča odoberať materiál z ložísk hnisavej infekcie pri ich vpichu injekčnou striekačkou, čas medzi odberom materiálu a výsevom na živnú pôdu by mal byť čo najkratší.
Keďže na kultiváciu anaeróbnych baktérií sa používajú špeciálne živné pôdy, ktoré by nemali obsahovať kyslík a majú nízky redoxný potenciál (-20 -150 mV), do ich zloženia sa zavádzajú indikátory - resazurín, metylénová modrá a pod. zmena tohto potenciálu. S jeho rastom sa obnovia bezfarebné formy indikátorov a menia svoju farbu: resazurín zafarbí médium ružová farba, a metylénová modrá - v modrej farbe. Takéto zmeny naznačujú nemožnosť použitia médií na kultiváciu anaeróbnych mikróbov.
Pomáha znižovať redoxný potenciál vnášania do média aspoň 0,05% agaru, ktorý zvýšením viskozity pomáha znižovať prísun kyslíka. To sa zase dosiahne použitím čerstvého (nie neskôr ako dve hodiny po výrobe) a redukovaného kultivačného média.
Je potrebné poznamenať, že vzhľadom na zvláštnosti fermentačného typu metabolizmu anaeróbnych baktérií vyžadujú médiá bohatšie na živiny a vitamíny. Najčastejšie sa používajú kardio-mozgové a pečeňové infúzie, sójové a kvasnicové extrakty, kazeínový hydrolytický digest, peptón, tryptón. Je povinné pridať rastové faktory, ako je tween-80, hemín, menadion, plná alebo hemolyzovaná krv.
Izolácia čistej kultúry aeróbnych mikroorganizmov pozostáva z niekoľkých krokov. Prvý deň (1. štádium štúdie) sa patologický materiál odoberie do sterilnej nádoby (skúmavka, banka, liekovka). Študuje sa pre vzhľad, konzistencia, farba, vôňa a iné znaky, sa pripraví náter, zafarbí sa a skúma sa pod mikroskopom. V niektorých prípadoch (akútna kvapavka, mor) je v tomto štádiu možné vykonať predchádzajúcu diagnózu a navyše vybrať médium, na ktoré sa bude materiál siať. Odobral som to bakteriologickou slučkou (používa sa najčastejšie), špachtľou podľa Drygalského metódy, vatovým tampónom. Poháre sú uzavreté, obrátené hore dnom, podpísané špeciálnou ceruzkou a umiestnené v termostate pri optimálnej teplote (37°C) na 18-48 rokov. Účelom štádia je získať izolované kolónie mikroorganizmov. Niekedy sa však s cieľom nahromadiť materiál vysieva na tekuté živné pôdy.
Nátery sa pripravujú z podozrivých kolónií, farbia sa Gramovou metódou na štúdium morfologických a tinktoriálnych vlastností patogénov a mobilné baktérie sa skúmajú v „visiacej“ alebo „rozdrvenej“ kvapke. Tieto znaky sú extrémne diagnostická hodnota pri charakterizovaní určitých druhov mikroorganizmov. Zvyšky študovaných kolónií sa opatrne odstránia z povrchu média bez toho, aby sa dotkli ostatných, a naočkujú sa na šikmý agar alebo na sektory Petriho misky s živným médiom, aby sa získala čistá kultúra. Skúmavky alebo misky s plodinami sa umiestnia do termostatu pri optimálnej teplote na 18-24 hodín.
Na tekutých živných pôdach môžu baktérie rásť aj inak, hoci znaky rastových prejavov sú horšie ako na pevných.
Baktérie sú schopné spôsobiť difúzny zákal média, pričom jeho farba sa nemusí zmeniť alebo získať farbu pigmentu. Tento rastový vzor sa najčastejšie pozoruje u väčšiny fakultatívnych anaeróbnych mikroorganizmov.
Niekedy sa na dne skúmavky vytvorí zrazenina. Môže byť drobivá, homogénna, viskózna, slizká atď. Médium nad ňou môže zostať priehľadné alebo sa môže zakaliť. Ak mikróby netvoria pigment, zrazenina má lividnú alebo žltkastú farbu. Anaeróbne baktérie rastú spravidla v podobnom poradí.
Rast steny sa prejavuje tvorbou vločiek, zŕn prichytených na vnútorných stenách skúmavky. Médium zostáva transparentné.
Aeróbne baktérie majú tendenciu rásť na povrchu. Často sa vytvorí jemný bezfarebný alebo modrastý film vo forme sotva viditeľného povlaku na povrchu, ktorý zmizne, keď sa médium otrasie alebo zamieša. Fólia môže byť vlhká, hustá, má pletenú, slizkú konzistenciu a prilepí sa na slučku a natiahne sa za ňu. Existuje však aj hustý, suchý, krehký film, ktorého farba závisí od pigmentu, ktorý produkujú mikroorganizmy.
Ak je to potrebné, urobí sa náter, zafarbí sa, vyšetrí sa pod mikroskopom a mikroorganizmy sa naočkujú slučkou na povrch hustého živného média, aby sa získali izolované kolónie.
Tretí deň (fáza 3 štúdie) sa študuje povaha rastu čistej kultúry mikroorganizmov a uskutočňuje sa jej identifikácia.
Najprv sa venuje pozornosť charakteristikám rastu mikroorganizmov na médiu a urobí sa náter, ktorý sa zafarbí pomocou Gramovej metódy, aby sa skontrolovala čistota kultúry. Ak sa pod mikroskopom pozorujú baktérie rovnakého typu morfológie, veľkosti a farbiacich vlastností (schopnosť farbiť), dochádza k záveru, že kultúra je čistá. V niektorých prípadoch už podľa vzhľadu a charakteristík ich rastu možno vyvodiť záver o type izolovaných patogénov. Určenie druhov baktérií podľa ich morfologických znakov sa nazýva morfologická identifikácia. Určenie typu patogénov podľa ich kultúrnych charakteristík sa nazýva kultúrna identifikácia.
Tieto štúdie však nestačia na konečný záver o type izolovaných mikróbov. Preto skúmajú biochemické vlastnosti baktérií. Sú dosť rôznorodé.
Najčastejšie sa študujú sacharolytické, proteolytické, peptolytické, hemolytické vlastnosti, tvorba enzýmov dekarboxylázy, oxidázy, katalázy, plazmakoagulázy, DNázy, fibrinolyzínu, redukcia dusičnanov na dusitany a pod. Na to existujú špeciálne živné pôdy, ktoré sú naočkované mikroorganizmami (pestrofarebný Hiss séria, MPB, zrazená srvátka, mlieko atď.).
Určenie typu patogénu podľa jeho biochemických vlastností sa nazýva biochemická identifikácia.
METÓDY PESTOVANIA A IZOLÁCIE ČISTEJ KULTÚRY BAKTÉRIÍ Pre úspešnú kultiváciu sú okrem vhodne zvoleného média a správne očkovania potrebné optimálne podmienky: teplota, vlhkosť, prevzdušňovanie (prívod vzduchu). Pestovanie anaeróbov je náročnejšie ako aeróbov, na odstránenie vzduchu zo živného média sa používajú rôzne metódy. Izolácia určitých typov baktérií (čistá kultúra) z testovaného materiálu, ktorý zvyčajne obsahuje zmes rôznych mikroorganizmov, je jednou z fáz každej bakteriologickej štúdie. Čistá mikrobiálna kultúra sa získava z izolovanej mikrobiálnej kolónie. Pri izolácii čistej kultúry z krvi (hemokultúra) je predbežne „rast“ v tekutom médiu: 10–15 ml sterilnej krvi sa naočkuje do 100–150 ml tekutého média. Pomer vysiatej krvi a živnej pôdy 1:10 nie je náhodný - tak sa dosiahne riedenie krvi (neriedená krv pôsobí škodlivo na mikroorganizmy). Fázy izolácie čistej kultúry baktérií Fáza I (natívny materiál) Mikroskopia (približná predstava o mikroflóre). Výsev na hustých živných médiách (získavanie kolónií). Etapa II (izolované kolónie) Štúdium kolónií (kultúrne vlastnosti baktérií). Mikroskopické štúdium mikróbov v zafarbenom nátere (morfologické vlastnosti baktérií). Inokulácia na živnom agare, aby sa izolovala čistá kultúra. Stupeň III (čistá kultúra) Stanovenie kultúrnych, morfologických, biochemických a iných vlastností na identifikáciu bakteriálnej kultúry IDENTIFIKÁCIA BAKTÉRIÍ Identifikácia izolovaných bakteriálnych kultúr sa vykonáva štúdiom morfológie baktérií, ich kultúrnych, biochemických a iných charakteristík, ktoré sú im vlastné. druhov.
Metódy laboratórnej diagnostiky vírusových infekcií sú rozdelené do niekoľkých veľkých skupín.
- Priame metódy, spočívajúce v detekcii priamo v biologickom materiáli samotného vírusu alebo protilátok proti nemu.
- Nepriame metódy spočívajú v umelej produkcii vírusu vo významných množstvách a jeho ďalšej analýze.
Najdôležitejšie diagnostické metódy v každodennej praxi zahŕňajú:
Sérologické diagnostické metódy - detekcia určitých protilátok alebo antigénov v krvnom sére pacienta v dôsledku reakcie antigén-protilátka (AG-AT). To znamená, že pri hľadaní špecifického antigénu u pacienta sa používa vhodná umelo syntetizovaná protilátka a podľa toho, naopak, pri detekcii protilátok sa používajú syntetizované antigény.
Imunofluorescenčná reakcia (RIF)
Na základe použitia farbivom značených protilátok. V prítomnosti vírusového antigénu sa viaže na označené protilátky a pod mikroskopom sa pozoruje špecifická farba, ktorá indikuje pozitívny výsledok. Pri tejto metóde je, žiaľ, nemožná kvantitatívna interpretácia výsledku, ale iba kvalitatívna.
Príležitosť kvantifikácia poskytuje enzýmový imunotest (ELISA). Je to podobné ako RIF, avšak ako markery sa nepoužívajú farbivá, ale enzýmy, ktoré premieňajú bezfarebné substráty na farebné produkty, čo umožňuje kvantifikovať obsah antigénov aj protilátok.
- Nenaviazané protilátky a antigény sa vymyjú.
- Pridá sa bezfarebný substrát a v jamkách dôjde k zafarbeniu antigénom, ktorý detegujeme tam bude enzým spojený s antigénom, po ktorom na špeciálne zariadenie posúdiť intenzitu luminiscencie farebného produktu.
Protilátky sa detegujú podobným spôsobom.
Reakcia nepriamej (pasívnej) hemaglutinácie (RPHA).
Metóda je založená na schopnosti vírusov viazať červené krvinky. Normálne červené krvinky padajú na dno tablety a vytvárajú takzvané tlačidlo. Ak sa však v skúmanom biologickom materiáli nachádza vírus, naviaže erytrocyty do takzvaného dáždnika, ktorý nespadne na dno jamky.
Ak je úlohou detegovať protilátky, možno to urobiť pomocou hemaglutinačné inhibičné reakcie (HITA). Do jamky s vírusom a erytrocytmi sa nakvapkajú rôzne vzorky. V prítomnosti protilátok naviažu vírus a červené krvinky spadnú na dno vytvorením „gombíka“.
Teraz sa pozrime na metódy priamej diagnostiky nukleových kyselín študovaných vírusov av prvom rade o PCR (polymerázová reťazová reakcia) .
Podstatou tejto metódy je detekcia špecifického fragmentu DNA alebo RNA vírusu opakovaným kopírovaním v umelých podmienkach. PCR sa môže uskutočniť iba s DNA, to znamená, že pre RNA vírusy je najprv potrebné vykonať reverznú transkripčnú reakciu.
Priama PCR sa vykonáva v špeciálnom zariadení nazývanom zosilňovač alebo termocykler, ktorý udržuje požadovanú teplotu. PCR zmes pozostáva z pridanej DNA, ktorá obsahuje pre nás záujmový fragment, primérov (krátky fragment nukleovej kyseliny komplementárny k cieľovej DNA, slúži ako primér na syntézu komplementárneho vlákna), DNA polymerázy a nukleotidov.
Kroky cyklu PCR:
- Denaturácia je prvou fázou. Teplota stúpne na 95 stupňov, reťazce DNA sa navzájom rozchádzajú.
- Žíhanie základného náteru. Teplota sa zníži na 50-60 stupňov. Priméry nájdu komplementárnu oblasť reťazca a naviažu sa na ňu.
-
Syntéza. Teplota sa opäť zvýši na 72, čo je pracovná teplota pre DNA polymerázu, ktorá začína od primérov a vytvára dcérske reťazce.
Cyklus sa mnohokrát opakuje. Po 40 cykloch sa z jednej molekuly DNA získa 10 x 12 stupňov kópií kópií požadovaného fragmentu.
Počas PCR v reálnom čase sú syntetizované kópie fragmentu DNA značené farbivom. Zariadenie registruje intenzitu žiary a vykresľuje akumuláciu požadovaného fragmentu v priebehu reakcie.
Moderné metódy laboratórnej diagnostiky s vysokou spoľahlivosťou umožňujú odhaliť prítomnosť vírusu – patogénu v organizme často dlho pred objavením sa prvých príznakov ochorenia.
Je založená na stanovení antivírusových protilátok v krvi pacienta pri sérologických reakciách pomocou špecifických vírusových antigénov – diagnostika alebo špeciálnych testovacích systémov. Sérologické reakcie pri vírusových infekciách sú umiestnené v tekutom médiu (RSK, RTGA, RNGA, RONGA, RTONGA, RIA), v géli (RPG, RRG, RVIEF) alebo na nosiči v pevnej fáze (napríklad na stenách jamka polystyrénovej platne s fixáciou jednej zo zložiek imunitnej odpovede - antigénu alebo protilátky). Takéto metódy na pevnej fáze ako ELISA, IEM, RGadsTO, RIF, RGads, RTGads sú známe.
Často kvôli prítomnosti v krvi väčšiny zdravých ľudí prirodzené antivírusové protilátky, sérologická diagnostika vírusových infekcií je založená na štúdii párové séra, odoberané na začiatku a vo vrchole ochorenia alebo v období rekonvalescencie, aby sa určil nárast titra protilátok. Za diagnosticky významné sa považuje štvornásobné alebo viacnásobné zvýšenie titra protilátok.
Zvýšenie citlivosti sérologických metód sa dosahuje adsorpciou antigénov alebo protilátok na erytrocytoch (RNGA, RONGA, RTONGA, RGadsTO, RRG), značených enzýmami (ELISA), rádioaktívnymi izotopmi (RIA, RPG) alebo fluorochrómami (RIF), Princíp lýzy erytrocytov sa využíva aj (ako indikátorové systémy) pri interakcii antigénov a protilátok v prítomnosti komplementu (RSK, RRG).
Reakcia fixácie komplementu (CFR) vo forme fixácie komplementu v chlade (v noci pri teplote +4 0 C) sa často využíva vo virológii na retrospektívnu diagnostiku množstva vírusových infekcií a na stanovenie vírusovo špecifických antigénov v materiáloch od pacientov .
Radiálna hemolytická reakcia (RRH) v agarózovom géli je založený na fenoméne hemolýzy erytrocytov senzibilizovaných antigénom pod vplyvom vírusovo špecifických protilátok v prítomnosti komplementu a používa sa na sérologickú diagnostiku infekcií chrípky, ARVI, ružienky, mumpsu a togavírusu.
Na spustenie reakcie sa k ovčím erytrocytom pridá 0,1 ml neriedeného vírusového antigénu (0,3 ml 10 % suspenzie) a zmes sa inkubuje 10 minút pri teplote miestnosti. Do 1,2 % agarózy sa pri teplote 42 0 C pridá 0,3 ml senzibilizovaných erytrocytov a 0,1 ml komplementu, zmes sa naleje na podložné sklíčka alebo do jamiek polystyrénových platní, do zmrazeného agarózového gélu sa vyrežú otvory prepichnite a naplňte študovaným a kontrolným sérom. Poháre alebo panely sa uzavrú vekom a umiestnia sa do vlhkej komory na 16-18 hodín v termostate. Reakcia sa zohľadňuje podľa priemeru hemolyzačnej zóny okolo otvorov naplnených sérom. V kontrole nedochádza k hemolýze.
2. Sérologické testy používané na diagnostiku vírusových infekcií.
Sérologické metódy, t.j. metódy na štúdium protilátok a antigénov pomocou reakcií antigén-protilátka stanovených v krvnom sére a iných tekutinách, ako aj v telesných tkanivách. Detekcia protilátok proti antigénom patogénu v krvnom sére pacienta umožňuje diagnostikovať ochorenie. Sérologické štúdie sa tiež používajú na identifikáciu mikrobiálnych antigénov, rôznych biologicky aktívnych látok, krvných skupín, tkanivových a nádorových antigénov, imunitných komplexov, bunkových receptorov atď. Keď je mikrób izolovaný od pacienta, patogén sa identifikuje štúdiom jeho antigénnych vlastností pomocou imunitné diagnostické séra, t. j. krvné séra hyperimunizovaných zvierat obsahujúce špecifické protilátky. Ide o takzvanú sérologickú identifikáciu mikroorganizmov. Vlastnosti interakcie protilátky s antigénom sú základom diagnostických reakcií v laboratóriách. In vitro reakcia medzi antigénom a protilátkou pozostáva zo špecifickej a nešpecifickej fázy. V špecifickej fáze dochádza k rýchlej špecifickej väzbe aktívneho miesta protilátky na determinant antigénu. Potom prichádza nešpecifická fáza – pomalšia, ktorá sa prejavuje viditeľnými fyzikálnymi javmi, ako je tvorba vločiek (fenomén aglutinácie) alebo zrazenina vo forme zákalu. Táto fáza vyžaduje určité podmienky (elektrolyty, optimálne pH média). Väzba antigénneho determinantu (epitopu) na aktívne miesto protilátkového Fab fragmentu je spôsobená van der Waalsovými silami, vodíkovými väzbami a hydrofóbnymi interakciami. Sila a množstvo antigénu viazaného protilátkami závisí od afinity, avidity protilátok a ich valencie.
3. Pôvodcovia malárie. malária - antroponotické infekčná choroba spôsobené niekoľkými druhmi prvokov rodu Plasmodium, prenášané komármi (Anopheles), sprevádzané horúčkou, anémiou, zväčšením pečene a sleziny. Pôvodcovia malárie patria medzi prvoky, kmeň Apicomplexa, triedu Sporozoa a druhy Pl. vivax, Pl.malariae, Pl.falciparum, Pl.ovale.
Epidemiológia. Zdrojom nákazy je zamorená osoba; prenášačom je samička komára rodu Anopheles. Hlavný mechanizmus prenosu je prenosný, a to uštipnutím napadnutej samičky komára.
Liečba a prevencia. Antimalariká majú rôzne účinky na asexuálne, sexuálne štádiá Plasmodium. Medzi hlavné antimalariká patria chinín, chlorochín, chinakrín, primachín, chinocíd, bigumal, chlorid atď. Preventívne opatrenia zamerané na zdroj patogénu (liečba pacientov s maláriou a nosičov) a ničenie nosičov patogénu - komárov. Vyvíjajú sa metódy očkovania založené na antigénoch získaných genetickým inžinierstvom.
1. Klasifikácia antibiotík podľa chemickej štruktúry, mechanizmu, spektra a typu účinku.Podľa chem. štrukturovať. Trieda 1 - B-laktám - penicilín, cefalosporín. 2 trieda - makrolidy - erytromycín, azitromycín. Trieda 3 - aminoglykozidy - streptomycín, kanamycín. Trieda 4 - tetracyklíny - oxytetracyklín, doxycyklín. 5 buniek - polypeptidy - polymyxín. 6 buniek - polyen- nystatín 7kl-anzamycín-rifampicín .
2. V závislosti od mechanizmu účinku sa rozlišuje päť skupín antibiotík: 1.gr antibiotiká, ktoré narúšajú syntézu bunkovej steny – β-laktám. 2.gr antibiotiká, ktoré narúšajú molekulárnu organizáciu a syntézu bunkových membrán - polymyxíny, polyény; 3.gr antibiotiká, ktoré narúšajú syntézu bielkovín - aminoglykozidy, tetracyklíny, makrolidy, chloramfenikol. 4.gr antibiotiká - inhibítory syntézy nukleových kyselín - chinolóny narúšajú DNA syntéza rifampicín - syntéza RNA, 5.gr antibiotiká, ktoré inhibujú syntézu purínov a aminokyselín - sulfanilamidy.Podľa spektra účinku antibiotiká tvoria päť skupín, podľa toho, na ktoré mikroorganizmy pôsobia. Každá z týchto skupín zahŕňa dve podskupiny: širokospektrálne a úzkospektrálne antibiotiká.1g. Najväčšiu skupinu liekov tvoria antibakteriálne antibiotiká.
a) antibiotiká široký rozsah akcie ovplyvňujú zástupcov všetkých troch divízií baktérií - aminoglykozidy, tetracyklíny atď.
b) Úzkospektrálne antibiotiká sú účinné proti malému spektru baktérií – flight-myxíny pôsobia na gracilicutes, vankomycín ovplyvňuje grampozitívne baktérie.
2gr - lieky proti tuberkulóze, antilepra, antisyfilitické lieky.
3. Antifungálne antibiotiká.
a) Amfotericín B má široké spektrum účinku, účinný pri kandidóze, blastomykóze, aspergilóze; v rovnakom čase
b) úzkospektrálne antibiotikum - nystatín, pôsobiaci na huby rodu Candida, je
4. Antiprotozoálne a antivírusové antibiotiká majú malý počet liekov.
5. Protinádorové antibiotiká – lieky, ktoré majú cytotoxický účinok. Väčšina z nich sa používa pri mnohých typoch nádorov – mitomycín C. Pôsobenie antibiotík na mikroorganizmy je spojené s ich schopnosťou potláčať určité biochemické reakcie prebiehajúce v mikrobiálnej bunke.
2. Teórie imunity.1. Teória imunity Mechnikov - fagocytóza zohráva rozhodujúcu úlohu v antibakteriálnej imunite. I.I.Mečnikov bol prvý, kto považoval zápal skôr za ochranný než deštruktívny jav. Obranné bunky, ktoré takto fungujú, vedec nazval „požieravé bunky“. Jeho mladí francúzski kolegovia navrhli používať grécke korene rovnakého významu. II Mechnikov prijal túto možnosť a objavil sa výraz „fagocyt“. 2. Teória imunity Ehrlich je jednou z prvých teórií tvorby protilátok, podľa ktorej majú bunky receptory špecifické pre antigén, ktoré sa pôsobením antigénu uvoľňujú ako protilátky. Ehrlich nazval antimikrobiálne krvné látky „protilátkou“. P. Ehrlich si uvedomil, že ešte pred kontaktom s konkrétnym mikróbom má telo už protilátky vo forme, ktorú nazval „bočné reťazce“ – ide o lymfocytové receptory pre antigény. Potom Ehrlich „aplikoval“ na farmakológiu: vo svojej teórii chemoterapie predpokladal preexistenciu receptorov v tele pre liečivých látok. V roku 1908 bola P. Ehrlichovi udelená Nobelova cena za humorálnu teóriu imunity. 3. Bezredkova teória imunity- teória, ktorá vysvetľuje ochranu organizmu pred množstvom infekčných ochorení výskytom špecifickej lokálnej bunkovej imunity voči patogénom. 4. Inštruktážne teórie imunita – všeobecný názov teórií tvorby protilátok, podľa ktorých vedúcu úlohu v imunitnej odpovedi zohráva antigén, ktorý sa priamo podieľa ako matrica na tvorbe špecifickej konfigurácie antideterminantu alebo pôsobí ako faktor, ktorý smerovo mení biosyntézu imunoglobulínov plazmatickými bunkami.
3. Pôvodca botulizmu. rod Clostridium druh Clostridium botulinum spôsobuje botulizmus – intoxikáciu jedlom, charakterizovanú poškodením centrálneho nervového systému. Ochorenie sa vyskytuje v dôsledku konzumácie potravín obsahujúcich C. Botulotoxíny - grampozitívne tyčinky so zaoblenými koncami. Má tvar tenisovej rakety. Nevytvárajte kapsulu. Mobilné. povinných anaeróbov. Podľa antigénnych vlastností sa delia na 7 sérovarov. Botulotoxín – najsilnejší zo všetkých biologických jedov – má neurotoxický účinok (smrteľná dávka pre človeka je asi 0,3 mikrogramu). Mikrobiologická diagnostika. Detekcia a identifikácia botulotoxínu v testovanom materiáli pomocou reakcie reverznej nepriamej hemaglutinácie (RONHA), reakcie neutralizácie toxínu antitoxínom (antitoxické sérum) na laboratórnych zvieratách. Bakteriologická metóda na detekciu patogénu v testovanom materiáli. špecifická profylaxia. Botulotoxoidy A, B, E sú súčasťou sextanatoxínu, užívaného podľa indikácií. Na núdzovú pasívnu profylaxiu je možné použiť antibotulínové antitoxické séra. Liečba. Používajú sa antitoxické anti-botulínové heterológne séra a homológne imunoglobulíny.
pestovanie. Na krvnom agare tvorí malé priehľadné kolónie obklopené zónou hemolýzy. odpor. Spóry C. botulinum majú veľmi vysokú odolnosť voči vysokým teplotám.
Epidemiológia. Z pôdy vstupuje botulínový bacil produkty na jedenie kde sa množí a uvoľňuje exotoxín. Cestou prenosu infekcie je jedlo. Najčastejšie sú faktorom prenosu infekcie konzervované potraviny (huby, zelenina, mäso, ryby). Choroba sa neprenáša z človeka na človeka. Patogenéza. Botulotoxín sa dostáva do tráviaceho traktu s jedlom. Toxín, ktorý je odolný voči pôsobeniu tráviacich enzýmov, sa vstrebáva cez črevnú stenu do krvného obehu a spôsobuje dlhotrvajúcu toxémiu. Toxín sa viaže na nervové bunky a blokuje prenos impulzov cez neuromuskulárne synapsie. V dôsledku toho sa vyvíja paralýza svalov hrtana, hltana, dýchacích svalov, čo vedie k zhoršeniu prehĺtania a dýchania, pozorujú sa zmeny v orgánoch videnia. klinický obraz. Inkubačná doba trvá od 6-24 hodín do 2-6 dní. Čím je inkubačná doba kratšia, tým je ochorenie závažnejšie. Zvyčajne choroba začína akútne, ale telesná teplota zostáva normálna. Možné sú rôzne varianty botulizmu – s prevahou symptómov poškodenia tráviaceho traktu, porúch zraku či funkcie dýchania. V prvom prípade sa choroba začína objavením sa sucha v ústach, nevoľnosti, vracania a hnačky. V druhej sú prvé prejavy ochorenia spojené so zrakovým postihnutím (pacient sa sťažuje na "hmlu" pred očami a dvojité videnie). V dôsledku paralýzy svalov hrtana sa objaví chrapot a potom hlas zmizne. Pacienti môžu zomrieť na paralýzu dýchania. Ochorenie môže byť komplikované akútnym zápalom pľúc, toxickou myokarditídou, sepsou. Úmrtnosť pri botulizme je 15-30%. Imunita. sa netvorí. Protilátky, ktoré vznikajú v priebehu choroby, sú namierené proti špecifickému sérovaru.
1.Metódy stanovenia citlivosti baktérií na antibiotiká. 1) Agarová difúzna metóda.Študovaný mikrób sa naočkuje na agarové živné médium a potom sa pridajú antibiotiká. prípravky sa zavedú buď do špeciálnych jamiek v agare, alebo sa na povrch semena položia disky s antibiotikami („disková metóda“). Výsledky sa zaznamenávajú za deň podľa prítomnosti alebo neprítomnosti mikrobiálneho rastu okolo otvorov (diskov). 2) Metódy stanovenia. minimálna hladina antibiotík, ktorý umožňuje in vitro zabrániť viditeľnému rastu mikróbov v živnom médiu alebo ho úplne sterilizuje. A) Stanovenie citlivosti baktérií na antibiotiká diskovou metódou. Študovaná bakteriálna kultúra sa naočkuje na trávnik na živnom agare alebo na AGV médiu v Petriho miske B) AGV médium: suchý živný rybí vývar, agar-agar, disubstituovaný fosforečnan sodný. C) Papierové disky obsahujúce určité dávky rôznych antibiotík sa umiestnia na naočkovaný povrch pomocou pinzety v rovnakej vzdialenosti od seba. Kultúry sa inkubujú pri 37 °C do nasledujúceho dňa. Podľa priemeru zón inhibície rastu študovanej bakteriálnej kultúry sa posudzuje jej citlivosť na antibiotiká.
D) Stanovenie citlivosti baktérií na antibiotiká metódou sériových riedení. určiť minimálnu koncentráciu antibiotika, ktorá inhibuje rast študovanej bakteriálnej kultúry.
E) Vyhodnotenie výsledkov stanovenia citlivosti mikroorganizmov na antibiotiká sa vykonáva podľa špeciálne pripravenej tabuľky, ktorá obsahuje hraničné hodnoty priemerov zón inhibície rastu pre rezistentné, stredne odolné a citlivé kmene, ako napr. ako aj hodnoty MIC antibiotík pre rezistentné a citlivé kmene. 3) Stanovenie antibiotika v krvi, moči a iných tekutinách ľudského tela. Dva rady skúmaviek sú umiestnené v stojane. V jednom z nich sa pripravia riedenia referenčného antibiotika, v druhom testovacia kvapalina. Potom sa do každej skúmavky pridá suspenzia testovacích baktérií pripravená v Hiss médiu s glukózou. Pri stanovení penicilínu, tetracyklínov, erytromycínu v testovacej kvapaline sa ako testovacia baktéria používa štandardný kmeň S. aureus a pri stanovení streptomycínu E. coli. Po inkubácii inokulácií pri 37 °C počas 18-20 hodín sa zaznamenajú výsledky experimentu o zakalení média a jeho farbení indikátorom v dôsledku rozkladu glukózy testovanými baktériami. Koncentrácia antibiotika sa stanoví vynásobením najvyššieho zriedenia testovacej tekutiny, ktoré inhibuje rast testovaných baktérií, minimálnou koncentráciou referenčného antibiotika, ktoré inhibuje rast rovnakých testovaných baktérií. Napríklad, ak je maximálne riedenie testovacej kvapaliny, ktorá inhibuje rast testovaných baktérií, 1:1024 a minimálna koncentrácia referenčného antibiotika, ktoré inhibuje rast tej istej testovanej baktérie, je 0,313 µg/ml, potom 1024-0,313=320 ug/ml je koncentrácia antibiotika v 1 ml.
4) Stanovenie schopnosti S. aureus produkovať beta-laktamázu. Do banky s 0,5 ml dennej bujónovej kultúry štandardného kmeňa stafylokoka citlivého na penicilín pridajte 20 ml roztaveného a na 45 °C vychladeného živného agaru, premiešajte a nalejte do Petriho misky. Po stuhnutí agaru sa do stredu misky na povrch média umiestni disk obsahujúci penicilín. Študované kultúry sa vysievajú pozdĺž polomerov disku pomocou slučky. Inokulácie sa inkubujú pri 37 °C do nasledujúceho dňa, potom sa zaznamenajú výsledky experimentu. Schopnosť študovaných baktérií produkovať beta-laktamázu sa posudzuje podľa prítomnosti rastu štandardného kmeňa stafylokoka okolo jednej alebo druhej zo študovaných kultúr (okolo disku).
2. Poruchy imunitný systém: primárne a sekundárne imunodeficiencie.Imunodeficiencie - Ide o narušenie normálneho imunitného stavu spôsobené poruchou jedného alebo viacerých mechanizmov imunitnej odpovede Primárne alebo vrodené imunodeficiencie Poruchy imunitného systému môžu ovplyvniť tak hlavné špecifické väzby vo fungovaní imunitného systému, ako aj faktory, ktoré určujú nešpecifickú rezistenciu . Možné sú kombinované a selektívne varianty porúch imunity. V závislosti od úrovne a povahy porúch sa rozlišujú humorálne, bunkové a kombinované imunodeficiencie.
Príčiny: zdvojenie chromozómov, bodové mutácie, defekt v enzýmoch metabolizmu nukleových kyselín, geneticky podmienené membránové poruchy, poškodenie genómu v embryonálnom období a pod. Primárne imunodeficiencie sa objavujú v skorých štádiách postnatálneho obdobia a dedia sa autozomálne recesívne. Prejavy- nedostatočná fagocytóza, komplementový systém, humorálna imunita (B-systém), bunková imunita (T-systém). Sekundárne alebo získané imunodeficiencie Sekundárne imunodeficiencie sa na rozdiel od primárnych vyvíjajú u jedincov s normálne fungujúcim imunitným systémom už od narodenia. Vznikajú vplyvom prostredia na úrovni fenotypu a vznikajú narušením funkcie imunitného systému v dôsledku rôznych ochorení alebo nepriaznivých účinkov na organizmus. Ovplyvnené sú T- a B-systémy imunity, faktory nešpecifickej rezistencie, možné sú aj ich kombinácie. Sekundárne imunodeficiencie sú oveľa bežnejšie ako primárne. Sekundárne imunodeficiencie sú prístupné imunokorekcii,
Sekundárne imunodeficiencie môžu byť:
po infekciách (najmä vírusových) a inváziách (protozoálne a helmintiázy);
s popáleninami;
s urémiou; s nádormi;
s metabolickými poruchami a vyčerpaním;
s dysbiózou;
s ťažkými zraneniami, rozsiahlymi chirurgickými operáciami, najmä tými, ktoré sa vykonávajú v celkovej anestézii; pri ožiarení pôsobenie chemikálií;
so starnutím,
lieky spojené s užívaním liekov.
Podľa klinického Prietok sa rozlišuje: 1) kompenzovaný, - zvýšená náchylnosť tela na infekčné agens. 2) subkompenzované - chronizácia infekčných procesov.
3) dekompenzované - generalizované infekcie spôsobené oportúnnymi mikróbmi (OPM) a malígnymi novotvarmi.
3. Pôvodca amébiázy. Taxonómia. Charakteristický. Mikrobiologická diagnostika. špecifická liečba. Amébiáza je infekčné ochorenie spôsobené Entamoeba histolytica, sprevádzané ulceratívnymi léziami hrubého čreva; možná tvorba abscesov v rôznych orgánoch; prebieha chronicky. Protozoa, kmeň Sarcomastidophora, podkmeň Sarcodina.
Morfológia a kultivácia. Patogén existuje v dvoch štádiách vývoja: vegetatívnom a cystickom. Vegetatívne štádium má viacero foriem (tkanivové, veľké vegetatívne, luminálne a precystické). Cysta (kľudové štádium) má oválny tvar, vzniká z vegetatívnych foriem v čreve. Infekcia nastáva, keď cysty patogénu vstupujú do čreva, kde tvoria črevné vegetatívne formy.
odpor. Mimo tela tkanivové a luminálne formy patogénu rýchlo (po 30 minútach) odumierajú. Cysty sú stabilné v prostredí, zostávajú vo výkaloch a vode pri teplote 20ºС mesiac. V potravinách, na zelenine a ovocí cysty pretrvávajú niekoľko dní.
Prenosový mechanizmus - fekálne-ale-orálne. Infekcia sa vyskytuje, keď sa cysty zavádzajú s jedlom, najmä zeleninou a ovocím, menej často vodou, prostredníctvom predmetov pre domácnosť. Muchy a šváby prispievajú k šíreniu cýst.
Patogenéza a klinický obraz. Cysty, ktoré sa dostali do čriev a formy améb tvorené lúmenom, v ňom môžu žiť bez toho, aby spôsobili ochorenie. S poklesom odolnosti tela améby prenikajú do črevnej steny a množia sa. Vyvíja sa črevná amebiáza. K tomuto procesu prispievajú niektorí predstavitelia črevnej mikroflóry. Postihnutá je horná časť hrubého čreva s tvorbou vredov, niekedy konečník. Častá je riedka stolica. Vo výkaloch sa nachádzajú hnisavé prvky a hlien. Môže dôjsť k perforácii črevnej steny s rozvojom purulentnej peritonitídy. Améby s prietokom krvi sa môžu dostať do pečene, pľúc, mozgu - vzniká extraintestinálna amébóza. Možno vzhľad amebiázy kože, ktorá sa vyvíja v dôsledku sekundárneho procesu. Na koži perianálnej oblasti, perinea a zadku sa tvoria erózie a nebolestivé vredy. Imunita. Pri amébióze je imunita nestabilná. Liečba a prevencia. V liečbe sa používajú tieto lieky: pôsobenie na améby nachádzajúce sa v lúmene čreva (deriváty oxychinolínov - quiniofon, enteroseptol, mexaform, intestopan, ako aj zlúčeniny arzénu - aminarson, osarsol atď.); pôsobenie na tkanivové formy améb (emetínové prípravky); pôsobenie na priesvitné formy améb a améb nachádzajúce sa v črevnej stene (tetracyklíny); pôsobiace na améby v ktorejkoľvek ich lokalizácii (deriváty imidazolu - metronidazol). Prevencia amébóza je spojená s identifikáciou a liečbou cystických exkretorov a nosičov améb.
Mikrobiologická diagnostika. Hlavnou metódou je mikroskopické vyšetrenie výkalov pacienta, ako aj obsahu abscesov vnútorných orgánov. Nátery sa farbia Lugolovým roztokom alebo hematoxylínom na identifikáciu cýst a trofozoitov. Sérologická metóda: RIGA, ELISA, RSK atď. Najvyšší titer protilátok sa zistí pri extraintestinálnej amébióze.
| " |
Odporúčame tiež
Dana Borisová dostala infarkt
Bezplatný online bot pre slamerov
Skupina "via gra" Hlavné fázy tvorivosti
Yana Meladze - silná žena s ťažkým osudom S kým teraz chodí Konstantin Meladze
Operátor MTS umožnil všetkým svojim predplatiteľom neplatiť za komunikáciu a mobilný internet vôbec
Ako zomrel Kobyakov: príčina smrti, biografia, osobný život, fotografia