Vírusos betegségek mikrobiológiai diagnosztikájának módszerei. Vírus izolálási és azonosítási módszerek
119. Vírusfertőzések diagnosztizálására használt szerológiai vizsgálatok.
Kimutatás a vérszérumban a beteg antitestei a kórokozó antigénjei ellen lehetővé teszik a betegség diagnózisát. Szerológiai vizsgálatokkal azonosítják a mikrobiális antigéneket, a különféle biológiailag aktív anyagokat, a vércsoportokat, a szöveti és tumorantigéneket, az immunkomplexeket, a sejtreceptorokat stb.
Mikroba izolálásakor A kórokozót a páciensből származó antigén tulajdonságainak vizsgálatával azonosítják immundiagnosztikai szérumok, azaz hiperimmunizált állatok specifikus antitesteket tartalmazó vérszérumai segítségével. Ez az ún szerológiai azonosítás mikroorganizmusok.
Széles körben használják a mikrobiológiában és az immunológiában agglutináció, precipitáció, neutralizációs reakciók, komplementet érintő reakciók, jelölt antitestek és antigének felhasználásával (radioimmunológiai, enzim immunoassay, immunfluoreszcens módszerek). A felsorolt reakciók a regisztrált hatásban és a stádiumtechnikában különböznek, azonban mindegyik az antigén és az antitest kölcsönhatásának reakcióján alapul, és mind az antitestek, mind az antigének kimutatására szolgálnak. Az immunitási reakciókat nagy érzékenység és specifitás jellemzi.
Az antitest és az antigén kölcsönhatásának jellemzői a laboratóriumi diagnosztikai reakciók alapját képezik. Reakció in vitro Az antigén és az antitest közötti szakasz egy specifikus és egy nem specifikus fázisból áll. BAN BEN specifikus fázis az antitest aktív helye gyorsan specifikusan kötődik az antigén determinánsához. Aztán jön nem specifikus fázis - lassabb, ami látható fizikai jelenségekben nyilvánul meg, például pelyhek képződése (agglutinációs jelenség) vagy csapadék zavarosodás formájában. Ez a fázis bizonyos feltételeket igényel (elektrolitok, a tápközeg optimális pH-ja).
Egy antigéndetermináns (epitóp) kötődése egy antitest Fab-fragmens aktív helyéhez a van der Waals-erőknek, hidrogénkötéseknek és hidrofób kölcsönhatásoknak köszönhető. Az antitestek által megkötött antigén erőssége és mennyisége az antitestek affinitásától, aviditásától és vegyértékétől függ.
Az expressz diagnosztikával kapcsolatos kérdésre:
1. A tiszta formában izolált tenyészet diagnosztizálható. 2. Speciálisan felszerelt laboratóriumokban (engedéllyel kell rendelkezni) 3. Szigorú szabályok betartása, mint pl.: elkülönített helyiség, speciális védőöltözet szükséges, a helyiségek kötelező teljes fertőtlenítése a kórokozóval végzett munka után, a kutatók fertőtlenítése munkavégzés után. Az expressz diagnosztika módszerei. 1. Bakteriológia - kombinált politróp táptalajok a morfok, tinctor, biochem gyors tanulmányozására. tulajdonságait. Enzimindikátor szalag alkalmazása, elektrofizikai módszer, különféle anyagokkal (glükázó, laktóz, stb.) impregnált papírkorongok módszere 2. Fágdiagnosztika. 3. Serodiagnosis - Mancini módszer, precipitációs reakció a gélben Ascoli, RA, RPGA szerint. 4. Bakterioszkópia - közvetlen és közvetett RIF. Expressz diagnosztikai módszerek: Kolera - MZ Ermolyeva, koleradiagnosztikai szérummal történő immobilizációs körzet, RIF. Tularemia - RA üvegen, RPHA Chume - fágtipizálás, szénhidrát papírkorongok módszere, RPHA. Anthrax - Ascoli módszer, RIF, RPGA. A növekedés jellege: három diffúz (fakultatív anaerob), a fenékhez közeli (kötelező anaerob) és a felszíni (obligát aerob) létezik.
Anaerob baktériumok tiszta kultúrájának izolálása
A laboratóriumi gyakorlatban gyakran szükséges anaerob mikroorganizmusokkal dolgozni. Igényesebbek a tápközegek iránt, mint az aerobok, gyakran speciális növekedési kiegészítőket igényelnek, tenyésztésük során az oxigénellátás megszűnését igénylik, növekedési periódusuk hosszabb. Ezért a velük való munka bonyolultabb, és jelentős figyelmet igényel a bakteriológusok és a laboránsok részéről.
Fontos az anaerob kórokozókat tartalmazó anyagok védelme a légköri oxigén mérgező hatásaitól. Ezért javasolt a gennyes fertőzés gócjaiból a szúráskor fecskendővel eltávolítani az anyagot, az anyag felvétele és a táptalajra vetés közötti idő minél rövidebb legyen.
Mivel az anaerob baktériumok tenyésztéséhez speciális táptalajokat használnak, amelyek nem tartalmazhatnak oxigént és alacsony redoxpotenciállal (-20-150 mV), indikátorokat vezetnek be összetételükbe - resazurin, metilénkék és hasonlók, amelyek reagálnak a változás ebben a potenciálban. Növekedésével az indikátorok színtelen formái újra megjelennek, és megváltoztatják színüket: a resazurin megfesti a táptalajt rózsaszín szín, és metilénkék - kékben. Az ilyen változások azt jelzik, hogy lehetetlen táptalajt használni az anaerob mikrobák tenyésztésére.
Segít csökkenteni a redox potenciált, ha a táptalajba legalább 0,05% agart viszünk be, amely viszkozitásának növelésével segít csökkenteni az oxigénellátást. Ezt viszont friss (az előállítás után legkésőbb két órával) és redukált táptalaj használatával is elérik.
Megjegyzendő, hogy az anaerob baktériumok fermentatív anyagcseréjének sajátosságai miatt tápanyagban és vitaminokban gazdagabb tápközeget igényelnek. A leggyakrabban használt szív-agy- és májinfúziók, szója- és élesztőkivonatok, kazein hidrolitikus emésztés, pepton, tripton. Kötelező növekedési faktorok hozzáadása, például tween-80, hemin, menadion, teljes vagy hemolizált vér.
Az aerob mikroorganizmusok tiszta kultúrájának izolálása több lépésből áll. Az első napon (a vizsgálat 1. szakasza) a kóros anyagot steril tartályba (kémcsőbe, lombikba, fiola) veszik. Azért tanulmányozzák kinézet, állaga, színe, illata és egyéb jelei, kenetet készítenek, megfestik és mikroszkóp alatt megvizsgálják. Egyes esetekben (akut gonorrhoea, pestis) ebben a szakaszban lehetőség van egy korábbi diagnózis felállítására, és ezen felül ki kell választani azt a táptalajt, amelyre az anyagot vetik. Bakteriológiai hurokkal (leggyakrabban használt), Drygalsky módszert követő spatulával, vattacsomóval szedtem. A csészéket le kell zárni, fejjel lefelé fordítani, speciális ceruzával aláírni, és az optimális hőmérsékleten (37 °C) termosztátba kell helyezni 18-48 évre. A szakasz célja izolált mikroorganizmus-telepek előállítása. Néha azonban az anyag felhalmozása érdekében folyékony táptalajra vetik.
A gyanús telepekről kenetet készítenek, Gram-módszerrel megfestik a kórokozók morfológiai és színárnyalati tulajdonságait, a mozgékony baktériumokat pedig „függő” vagy „zúzott” cseppben vizsgálják. Ezek a jelek rendkívüliek diagnosztikai érték bizonyos típusú mikroorganizmusok jellemzésekor. A vizsgált telepek maradványait óvatosan eltávolítják a táptalaj felületéről anélkül, hogy a többihez hozzáérnének, és ferde agaron vagy Petri-csésze szektoraiban beoltják tápközeggel, hogy tiszta tenyészetet kapjanak. A terményeket tartalmazó kémcsöveket vagy edényeket egy termosztátba helyezzük az optimális hőmérsékleten 18-24 órára.
A folyékony táptalajokon a baktériumok másként is szaporodhatnak, bár a növekedési megnyilvánulások jellemzői gyengébbek, mint a szilárdokon.
A baktériumok képesek a táptalaj diffúz zavarosodását okozni, míg színe nem változtathatja meg vagy nem veheti fel a pigment színét. Ezt a növekedési mintát leggyakrabban a legtöbb fakultatív anaerob mikroorganizmusnál figyelték meg.
Néha csapadék képződik a cső alján. Lehet omlós, homogén, viszkózus, nyálkás stb. A felette lévő közeg átlátszó maradhat vagy zavarossá válhat. Ha a mikrobák nem alkotnak pigmentet, a csapadék élénk vagy sárgás színű. Általában az anaerob baktériumok hasonló sorrendben szaporodnak.
A fal növekedése a kémcső belső falaihoz tapadt pelyhek, szemcsék képződésében nyilvánul meg. A közeg átlátszó marad.
Az aerob baktériumok hajlamosak a felszínen szaporodni. A felületen gyakran finom színtelen vagy kékes film képződik alig észrevehető bevonat formájában, amely eltűnik a közeg lerázásakor vagy felrázásakor. A film lehet nedves, vastag, kötött, nyálkás állagú, ragadhat a hurokhoz, nyúlik rá. Létezik azonban sűrű, száraz, törékeny film is, melynek színe a mikroorganizmusok által termelt pigmenttől függ.
Szükség esetén kenetet készítenek, megfestik, mikroszkóp alatt megvizsgálják, és a mikroorganizmusokat egy hurokkal beoltják egy sűrű táptalaj felületére, hogy izolált telepeket kapjanak.
A harmadik napon (a vizsgálat 3. szakasza) a mikroorganizmusok tiszta kultúrájának növekedésének természetét tanulmányozzák és azonosítják.
Először is figyelmet fordítanak a mikroorganizmusok táptalajon történő szaporodásának jellemzőire, és kenetet készítenek, Gram-módszerrel megfestve, hogy ellenőrizzék a tenyészet tisztaságát. Ha azonos típusú morfológiájú, méretű és színezési (festési képességű) baktériumokat figyelünk meg mikroszkóp alatt, azt a következtetést vonjuk le, hogy a tenyészet tiszta. Egyes esetekben már megjelenésük és növekedésük jellemzői alapján következtetést lehet levonni az izolált kórokozók típusára. A baktériumfajok morfológiai jellemzői alapján történő meghatározását morfológiai azonosításnak nevezzük. A kórokozók típusának kulturális jellemzőik alapján történő meghatározását kulturális azonosításnak nevezzük.
Ezek a vizsgálatok azonban nem elegendőek ahhoz, hogy végső következtetést levonjunk az izolált mikrobák típusáról. Ezért tanulmányozzák a baktériumok biokémiai tulajdonságait. Elég változatosak.
Leggyakrabban szacharolitikus, proteolitikus, peptolitikus, hemolitikus tulajdonságokat, dekarboxiláz, oxidáz, kataláz, plazmakoaguláz, DNáz, fibrinolizin enzimek képződését, a nitrátok nitritté redukálását és hasonlókat vizsgálnak. Ehhez speciális táptalajok vannak, amelyeket mikroorganizmusokkal oltottak be (tarka Hiss sorozat, MPB, aludttej, tej stb.).
A kórokozó típusának biokémiai tulajdonságai alapján történő meghatározását biokémiai azonosításnak nevezzük.
A TISZTA BAKTÉRIUMTÉRÉS TERMESZTÉSI MÓDSZEREI ÉS IZOLÁLÁSA A sikeres tenyésztéshez a megfelelően megválasztott táptalajokon és megfelelően oltott körülményeken túl optimális körülményekre is szükség van: hőmérséklet, páratartalom, levegőztetés (levegőellátás). Az anaerobok tenyésztése nehezebb, mint az aerobok, különféle módszereket alkalmaznak a levegő eltávolítására a tápközegből. Bizonyos típusú baktériumok izolálása (tiszta kultúra) a vizsgálati anyagból, amely általában különféle mikroorganizmusok keverékét tartalmazza, minden bakteriológiai vizsgálat egyik szakasza. Egy izolált mikrobakolóniából tiszta mikrobiális tenyészetet nyerünk. A tiszta tenyészet vérből történő izolálásakor (hemokultúra) előzetesen folyékony tápközegben „tenyésztik”: 100–150 ml folyékony táptalajba 10–15 ml steril vért oltunk be. Az elvetett vér és a táptalaj aránya 1:10 nem véletlen - így érhető el a vérhígulás (a hígítatlan vér károsan hat a mikroorganizmusokra). A tiszta baktériumkultúra izolálásának szakaszai I. szakasz (natív anyag) Mikroszkópia (a mikroflóra durva elképzelése). Sűrű táptalajra vetés (telepek beszerzése). II. szakasz (izolált telepek) Kolóniák (baktériumok tenyésztési tulajdonságai) vizsgálata. Mikrobák mikroszkópos vizsgálata festett kenetben (a baktériumok morfológiai tulajdonságai). Inokulálás tápanyag-agarra ferdén a tiszta kultúra izolálásához. III. szakasz (tiszta tenyészet) Kulturális, morfológiai, biokémiai és egyéb tulajdonságok meghatározása a baktériumkultúra azonosításához A BAKTÉRIUMOK AZONOSÍTÁSA Az izolált baktériumtenyészetek azonosítása a baktériumok morfológiájának, valamint az egyes baktériumkultúrákban rejlő kulturális, biokémiai és egyéb jellemzőiknek a tanulmányozásával történik. faj.
A vírusfertőzések laboratóriumi diagnózisának módszerei több nagy csoportra oszthatók.
- Közvetlen módszerek, amelyek magukban foglalják magának a vírusnak vagy az ellene lévő antitesteknek a biológiai anyagában történő közvetlen kimutatását.
- A közvetett módszerek a vírus jelentős mennyiségben történő mesterséges előállítása és további elemzése.
A mindennapi gyakorlatban a legfontosabb diagnosztikai módszerek a következők:
Szerológiai diagnosztikai módszerek - bizonyos antitestek vagy antigének kimutatása a páciens vérszérumában az antigén-antitest (AG-AT) reakció eredményeként. Ez azt jelenti, hogy amikor egy specifikus antigént keresünk egy páciensben, megfelelő mesterségesen szintetizált antitestet használnak, és ennek megfelelően, ellenkezőleg, amikor antitesteket észlelnek, szintetizált antigéneket használnak.
Immunfluoreszcens reakció (RIF)
A festékkel jelölt antitestek használata alapján. Vírusantigén jelenlétében a jelölt antitestekhez kötődik, és mikroszkóp alatt egy specifikus szín figyelhető meg, ami azt jelzi, pozitív eredmény. Ezzel a módszerrel sajnos az eredmény kvantitatív értelmezése lehetetlen, de csak minőségileg.
Lehetőség számszerűsítése enzim immunoassay-t (ELISA) ad. Hasonló a RIF-hez, azonban nem színezékeket használnak markerként, hanem olyan enzimeket, amelyek színtelen szubsztrátumokat alakítanak át színes termékekké, ami lehetővé teszi mind az antigének, mind az antitestek mennyiségi meghatározását.
- A meg nem kötött antitestek és antigének elmosódnak.
- Színtelen szubsztrátot adunk hozzá, és a lyukakban megfestődik az általunk kimutatott antigén egy enzim kapcsolódik az antigénhez, ami után tovább speciális eszközértékelje a színes termék lumineszcenciájának intenzitását.
Az antitestek kimutatása hasonló módon történik.
Az indirekt (passzív) hemagglutináció (RPHA) reakciója.
A módszer azon alapul, hogy a vírusok képesek megkötni a vörösvértesteket. Normális esetben a vörösvértestek a tabletta aljára esnek, létrehozva az úgynevezett gombot. Ha azonban vírus van a vizsgált biológiai anyagban, az úgynevezett esernyővé köti a vörösvértesteket, amely nem esik a kút aljára.
Ha a feladat az antitestek kimutatása, akkor ezt meg lehet tenni a segítségével hemagglutinációs gátlási reakciók (HITA). Különféle mintákat csepegtetünk a lyukba a vírussal és az eritrocitákkal. Antitestek jelenlétében megkötik a vírust, és a vörösvértestek egy „gomb” képződésével az aljára esnek.
Most nézzük meg a vizsgált vírusok nukleinsavainak közvetlen diagnosztizálásának módszereit, éselőször is a PCR-ről (polimeráz láncreakció) .
Ennek a módszernek a lényege, hogy a vírus DNS-ének vagy RNS-ének egy specifikus fragmentumát mesterséges körülmények között ismételten lemásolják. A PCR csak DNS-sel végezhető, azaz RNS-vírusok esetében először reverz transzkripciós reakciót kell végrehajtani.
A közvetlen PCR-t egy speciális eszközben, úgynevezett erősítőben vagy termikus ciklusban hajtják végre, amely fenntartja a kívánt hőmérsékletet. A PCR keverék hozzáadott DNS-ből, amely tartalmazza a számunkra érdekes fragmenst, primerekből (egy rövid nukleinsav fragmentum, amely komplementer a cél DNS-hez, primerként szolgál a komplementer szál szintéziséhez), DNS polimerázból és nukleotidokból.
A PCR ciklus lépései:
- A denaturáció az első szakasz. A hőmérséklet 95 fokra emelkedik, a DNS-láncok eltérnek egymáshoz képest.
- Primer lágyítás. A hőmérsékletet 50-60 fokra csökkentjük. A primerek megtalálják a lánc komplementer régióját és kötődnek hozzá.
-
Szintézis. A hőmérsékletet ismét 72 °C-ra emeljük, ez a DNS-polimeráz működési hőmérséklete, amely a primerekből kiindulva leányláncokat épít fel.
A ciklus többször megismétlődik. 40 ciklus után egy DNS-molekulából 10*12 fokos másolatot kapunk a kívánt fragmentum másolatairól.
A valós idejű PCR során a DNS-fragmens szintetizált másolatait festékkel jelölik. A készülék regisztrálja a ragyogás intenzitását és ábrázolja a kívánt fragmens felhalmozódását a reakció során.
A modern, nagy megbízhatóságú laboratóriumi diagnosztikai módszerek lehetővé teszik a vírus jelenlétének kimutatását - a kórokozót a szervezetben, gyakran már jóval a betegség első tüneteinek megjelenése előtt.
A vírusellenes antitestek meghatározásán alapul a páciens vérében szerológiai reakciókban, specifikus vírusantigének - diagnosztikai vagy speciális tesztrendszerek - felhasználásával. A vírusfertőzésekben a szerológiai reakciókat folyékony közegbe (RSK, RTGA, RNGA, RONGA, RTONGA, RIA), gélbe (RPG, RRG, RVIEF) vagy szilárd fázisú hordozóra (pl. polisztirol lemez lyuka, amely az immunválasz egyik összetevőjét - antigént vagy antitestet - rögzíti). Ismertek olyan szilárd fázisú módszerek, mint az ELISA, IEM, RGadsTO, RIF, RGads, RTGads.
Gyakran a többség vérében való jelenléte miatt egészséges emberek természetes antivirális antitestek, a vírusfertőzések szerológiai diagnosztikája a vizsgálaton alapul párosított szérumok, a betegség kezdetén és magasságában vagy a lábadozás időszakában az antitesttiter növekedésének meghatározása céljából. Az antitesttiter négyszeres vagy nagyobb növekedése diagnosztikailag szignifikáns.
A szerológiai módszerek érzékenységének növelése az enzimekkel (ELISA), radioaktív izotópokkal (RIA, RPG) vagy fluorokrómokkal (RIF) jelölt vörösvértesteken (RNGA, RONGA, RTONGA, RGadsTO, RRG) található antigének vagy antitestek adszorpciójával érhető el. Az erythrocyta lízist is használják (indikátorrendszerként) az antigének és antitestek kölcsönhatása során komplement (RSK, RRG) jelenlétében.
Komplement rögzítési reakció (CFR) komplementkötés formájában hidegben (éjszaka +4 0 C hőmérsékleten) gyakran használják a virológiában számos vírusfertőzés retrospektív diagnosztizálására és vírusspecifikus antigének meghatározására betegektől származó anyagokban. .
Radiális hemolízis reakció (RRH) Az agaróz gélben az antigénnel érzékenyített eritrociták hemolízisének jelenségén alapul, vírusspecifikus antitestek hatására komplement jelenlétében, és influenza, ARVI, rubeola, mumpsz és togavírus fertőzések szerológiai diagnosztikájára használják.
A reakció felállításához 0,1 ml hígítatlan vírusantigént adunk a birka eritrocitáihoz (0,3 ml 10%-os szuszpenzió), és az elegyet 10 percig szobahőmérsékleten inkubáljuk. 1,2%-os agarózhoz 42 0 C-on 0,3 ml szenzitizált eritrocitát és 0,1 ml komplementet adunk, a keveréket tárgylemezekre vagy polisztirol lemezek lyukaiba öntjük, a fagyasztott agaróz gélbe lyukakat vágunk. lyukasztó, és megtöltjük a vizsgált és a kontroll szérummal. Az üvegeket vagy paneleket fedővel le kell zárni, és 16-18 órára párás kamrába helyezzük termosztátban. A reakció elszámolását a szérummal töltött lyukak körüli hemolízis zóna átmérője szerint végezzük. A kontrollban nincs hemolízis.
2. Vírusfertőzések diagnosztizálására használt szerológiai vizsgálatok.
Szerológiai módszerek, azaz antitestek és antigének vizsgálatára szolgáló módszerek vérszérumban és más folyadékokban, valamint testszövetekben meghatározott antigén-antitest reakciók segítségével. A kórokozó antigénjei elleni antitestek kimutatása a beteg vérszérumában lehetővé teszi a betegség diagnosztizálását. A szerológiai vizsgálatokat mikrobiális antigének, különféle biológiailag aktív anyagok, vércsoportok, szövet- és daganatantigének, immunkomplexek, sejtreceptorok stb. azonosítására is használják. Amikor egy mikrobát izolálnak egy páciensből, a kórokozó azonosítása annak antigén tulajdonságainak vizsgálatával történik. immundiagnosztikai szérumok, azaz hiperimmunizált állatok specifikus antitesteket tartalmazó vérszérumai. Ez a mikroorganizmusok úgynevezett szerológiai azonosítása. Az antitest és az antigén kölcsönhatásának jellemzői a laboratóriumi diagnosztikai reakciók alapját képezik. Az antigén és egy antitest közötti in vitro reakció egy specifikus és egy nem specifikus fázisból áll. A specifikus fázisban az antitest aktív helyének gyors specifikus kötődése megy végbe az antigén determinánsához. Ezután jön a nem specifikus fázis - lassabb, ami látható fizikai jelenségekben nyilvánul meg, mint például pelyhek képződése (agglutinációs jelenség), vagy csapadék formájában zavarosság formájában. Ez a fázis bizonyos feltételeket igényel (elektrolitok, a tápközeg optimális pH-ja). Egy antigéndetermináns (epitóp) kötődése egy antitest Fab-fragmens aktív helyéhez a van der Waals-erőknek, hidrogénkötéseknek és hidrofób kölcsönhatásoknak köszönhető. Az antitestek által megkötött antigén erőssége és mennyisége az antitestek affinitásától, aviditásától és vegyértékétől függ.
3. A malária kórokozói. malária - antroponotikus fertőző betegség a Plasmodium nemzetségbe tartozó protozoa több faja okozza, szúnyogok (Anopheles) terjesztik, láz, vérszegénység, máj- és lépmegnagyobbodás kíséri. A malária kórokozói a Protozoa, az Apicomplexa törzs, a Sporozoa osztály és a Pl fajok közé tartoznak. vivax, Pl. malariae, Pl. falciparum, Pl. ovale.
Járványtan. A fertőzés forrása egy fertőzött személy; a hordozó az Anopheles nemzetségbe tartozó nőstény szúnyog. A fő átviteli mechanizmus egy fertőzött nőstény szúnyogcsípés útján terjed.
Kezelés és megelőzés. A maláriaellenes szerek eltérő hatással vannak a Plasmodium aszexuális és szexuális stádiumára. A főbb maláriaellenes szerek közé tartozik a kinin, klorokin, kinakrin, primakin, quinocid, bigumal, chloridin stb. Megelőző intézkedések célja a kórokozó forrása (maláriás betegek és hordozók kezelése), valamint a kórokozó hordozóinak - a szúnyogoknak - megsemmisítése. A géntechnológiával nyert antigéneken alapuló vakcinázási módszereket fejlesztenek.
1. Az antibiotikumok osztályozása kémiai szerkezet, mechanizmus, spektrum és hatástípus szerint.A chem. struct. 1. osztály - B-laktám - penicillin, cefalosporin. 2 osztály - makrolidok - eritromicin, azitromicin. 3. osztály - aminoglikozidok - sztreptomicin, kanamicin. 4. osztály - tetraciklinek - oxitetraciklin, doxiciklin. 5 sejt - polipeptidek - polimixin. 6 sejt - polien- nisztatin 7kl-anzamycin-rifampicin .
2. A hatásmechanizmustól függően az antibiotikumok öt csoportját különböztetjük meg: 1.gr antibiotikumok, amelyek megzavarják a sejtfal szintézisét - β-laktám. 2.gr antibiotikumok, amelyek megzavarják a sejtmembránok molekuláris szerveződését és szintézisét - polimixinek, poliének szintézis , rifampicin - RNS szintézis 5.gr purinok és aminosavak szintézisét gátló antibiotikumok - szulfanilamidok Hatásspektruma szerint az antibiotikumok öt csoportba sorolhatók, attól függően, hogy melyik mikroorganizmust érintik. Mindegyik csoport két alcsoportot foglal magában: széles spektrumú és szűk spektrumú antibiotikumok. Az antibakteriális antibiotikumok alkotják a gyógyszerek legnagyobb csoportját.
a) antibiotikumok széles választék az intézkedések a baktériumok mindhárom osztályának képviselőit érintik - aminoglikozidok, tetraciklinek stb.
b) A szűk spektrumú antibiotikumok a baktériumok kis köre ellen hatásosak – a repülés-mixinek a gracilicutákra, a vankomicin a gram-pozitív baktériumokra hat.
2gr - tuberkulózis, lepraellenes, szifilitikus szerek.
3. Gombaellenes antibiotikumok.
a) Az amfotericin B széles hatásspektrumú, hatásos candidiasis, blastomycosis, aspergillosis esetén; ugyanabban az időben
b) szűk spektrumú antibiotikum - a nisztatin, amely a Candida nemzetséghez tartozó gombákra hat
4. Az antiprotozoális és vírusellenes antibiotikumok kis számú gyógyszert tartalmaznak.
5. Daganatellenes antibiotikumok - citotoxikus hatású gyógyszerek. Legtöbbjüket sokféle daganatban alkalmazzák - a mitomicin C. Az antibiotikumok mikroorganizmusokra gyakorolt hatása összefügg azzal a képességükkel, hogy elnyomják a mikrobiális sejtben előforduló bizonyos biokémiai reakciókat.
2. Az immunitás elméletei.1. Az immunitás elmélete Mechnikov - a fagocitózis döntő szerepet játszik az antibakteriális immunitásban. I. I. Mechnikov volt az első, aki a gyulladást inkább védő, semmint pusztító jelenségnek tekintette. A tudós az így működő védekező sejteket "emésztő sejteknek" nevezte. Fiatal francia kollégái az azonos jelentésű görög gyökerek használatát javasolták. II. Mechnikov elfogadta ezt a lehetőséget, és megjelent a „fagocita” kifejezés. 2. Az immunitás elmélete Az Ehrlich az egyik első antitestképzési elmélet, amely szerint a sejteknek antigén-specifikus receptorai vannak, amelyek antigén hatására antitestként szabadulnak fel. Ehrlich az antimikrobiális véranyagokat „ellenanyagnak” nevezte. P. Ehrlich rájött, hogy a szervezetben már egy adott mikrobával való érintkezés előtt is vannak antitestek az általa "oldalláncoknak" nevezett formában - ezek az antigének limfocita receptorai. Aztán Ehrlich "alkalmazta" a gyógyszerészetet: a kemoterápia elméletében feltételezte, hogy a szervezetben már léteznek receptorok. gyógyászati anyagok. 1908-ban P. Ehrlich Nobel-díjat kapott az immunitás humorális elméletéért. 3. Bezredka immunitáselmélete- egy elmélet, amely megmagyarázza a szervezet számos fertőző betegséggel szembeni védelmét a kórokozókkal szembeni specifikus helyi sejtimmunitás kialakulásával. 4. Tanulságos elméletek Az immunitás az antitestképződés elméleteinek általános neve, amely szerint az immunválaszban a vezető szerepet egy olyan antigén kapja, amely mátrixként közvetlenül részt vesz egy antidetermináns specifikus konfigurációjának kialakításában, vagy olyan faktorként működik, amely irányított. megváltoztatja az immunglobulinok plazmasejtek általi bioszintézisét.
3. A botulizmus kórokozója. nemzetség Clostridium fajok A Clostridium botulinum botulizmust - ételmérgezést - okoz, amelyet a központi idegrendszer károsodása jellemez. A betegség a C. Botulinum toxinokat tartalmazó élelmiszerek – lekerekített végű gram-pozitív rudak – fogyasztása következtében alakul ki. Alakja olyan, mint egy teniszütő. Ne alakítsunk kapszulát. Mobil. kötelező anaerobok. Az antigén tulajdonságai szerint 7 szerovariánsra oszthatók. A botulinum exotoxin - az összes biológiai méreg közül a legerősebb - neurotoxikus hatással rendelkezik (az ember halálos dózisa körülbelül 0,3 mikrogramm). Mikrobiológiai diagnosztika. A botulinum toxin kimutatása és azonosítása a vizsgálati anyagban a reverz közvetett hemagglutináció (RONHA) reakciójával, a toxinsemlegesítés antitoxinnal (antitoxikus szérummal) történő reakciójával laboratóriumi állatokon. Bakteriológiai módszer kórokozó kimutatására a vizsgált anyagban. specifikus profilaxis. Az A, B, E botulinum toxoidok a szextanatoxin részét képezik, javallatok szerint használják. Sürgősségi passzív profilaxis céljára botulinum elleni antitoxikus szérum használható. Kezelés. Antitoxikus botulinum elleni heterológ szérumokat és homológ immunglobulinokat használnak.
termesztés. A vér agaron kis átlátszó telepeket képez, amelyeket hemolízis zóna vesz körül. ellenállás. A C. botulinum spórái nagyon jól ellenállnak a magas hőmérsékletnek.
Járványtan. A talajból a botulinum bacillus jut be élelmiszer termékek ahol szaporodik és exotoxint szabadít fel. A fertőzés átvitelének módja a táplálék. Leggyakrabban a konzerv (gomba, zöldség, hús, hal) a fertőzés átvitelének tényezője. A betegség emberről emberre nem terjed. Patogenezis. A botulinum toxin étellel kerül az emésztőrendszerbe. Az emésztőenzimek hatásának ellenálló toxin a bélfalon keresztül felszívódik a véráramba, és hosszan tartó toxémiát okoz. A toxin az idegsejtekhez kötődik, és blokkolja az impulzusok átvitelét a neuromuszkuláris szinapszisokon keresztül. Ennek eredményeként a gége, a garat, a légzőizmok izomzatának bénulása alakul ki, ami nyelési és légzési zavarokhoz vezet, a látásszervek változásai figyelhetők meg. klinikai kép. A lappangási idő 6-24 órától 2-6 napig tart. Minél rövidebb a lappangási idő, annál súlyosabb a betegség. Általában a betegség akutan kezdődik, de a testhőmérséklet normális marad. A botulizmus különféle változatai lehetségesek - az emésztőrendszer károsodásának tünetei, látási zavarok vagy légzési funkciók túlsúlya. Az első esetben a betegség szájszárazság, hányinger, hányás és hasmenés megjelenésével kezdődik. A másodikban a betegség első megnyilvánulásai látásromlással járnak (a beteg panaszkodik a szem előtti "ködről" és a kettős látásról. A gége izmainak bénulása következtében rekedtség jelentkezik, majd a hang eltűnik. A betegek légzésbénulás következtében meghalhatnak. A betegséget akut tüdőgyulladás, toxikus szívizomgyulladás, szepszis bonyolíthatja. A botulizmus mortalitása 15-30%. Immunitás. nem alakul ki. A betegség során termelődő antitestek egy adott szerovariáns ellen irányulnak.
1.A baktériumok antibiotikumokkal szembeni érzékenységének meghatározására szolgáló módszerek. 1) Agar diffúziós módszer. A vizsgált mikrobát agar táptalajra oltjuk, majd antibiotikumot adunk hozzá. a készítményeket vagy speciális agar üregekbe juttatják, vagy antibiotikumokat tartalmazó korongokat helyeznek el a mag felületén (a „korongos módszer”). Az eredményeket a lyukak (korongok) körüli mikrobaszaporodás jelenléte vagy hiánya egy napon belül rögzíti. 2) Meghatározási módszerek. minimális antibiotikum szint, amely lehetővé teszi in vitro a mikrobák látható növekedésének megakadályozását a tápközegben vagy teljesen sterilizálja azt. A) Baktériumok antibiotikum-érzékenységének meghatározása korongos módszerrel. A vizsgált baktériumtenyészetet tápagarra vagy AGV táptalajra, Petri-csészében oltjuk be gyeppel B) AGV táptalaj: száraz táphallé, agar-agar, diszubsztituált nátrium-foszfát. C) A magozott felületre csipesszel, egymástól azonos távolságra helyezzük a különböző dózisú antibiotikumokat tartalmazó papírkorongokat. A tenyészeteket 37 °C-on inkubáljuk másnapig. A vizsgált baktériumtenyészet növekedésgátlási zónáinak átmérője alapján ítéljük meg annak antibiotikum-érzékenységét.
D) A baktériumok antibiotikumokkal szembeni érzékenységének meghatározása sorozathígítások módszerével. határozza meg az antibiotikum minimális koncentrációját, amely gátolja a vizsgált baktériumtenyészet növekedését.
E) A mikroorganizmusok antibiotikum-érzékenységének megállapítása eredményeinek értékelése egy speciálisan elkészített táblázat alapján történik, amely tartalmazza a növekedésgátló zónák átmérőjének határértékeit rezisztens, közepesen rezisztens és érzékeny törzsekre, pl. valamint az antibiotikumok MIC-értékei a rezisztens és érzékeny törzsek esetében. 3) Antibiotikum meghatározása vérben, vizeletben és az emberi test egyéb folyadékaiban. Két sor kémcsövet helyezünk egy állványba. Az egyikben a referencia antibiotikum hígításait, a másikban a tesztfolyadékot készítik. Ezután minden kémcsőbe glükózt tartalmazó Hiss-tápközegben készített tesztbaktérium-szuszpenziót adunk. A penicillin, tetraciklinek, eritromicin vizsgálati folyadékban történő meghatározásakor a S. aureus standard törzsét használjuk tesztbaktériumként, a streptomycin meghatározásakor pedig az E. colit. Az oltások 37 °C-on 18-20 órás inkubálása után feljegyezzük a tápközeg zavarosságára és indikátorral való festésére vonatkozó kísérlet eredményeit a glükóz tesztbaktériumok általi lebontása miatt. Az antibiotikum-koncentrációt úgy határozzák meg, hogy a tesztfolyadék legmagasabb hígítását, amely gátolja a tesztbaktériumok növekedését, megszorozzák az azonos tesztbaktériumok növekedését gátló referencia-antibiotikum minimális koncentrációjával. Például, ha a tesztfolyadék maximális hígítása, amely gátolja a tesztbaktériumok növekedését 1:1024, és az azonos tesztbaktériumok növekedését gátló referencia antibiotikum minimális koncentrációja 0,313 µg/ml, akkor az 1024-0,313=320 µg/ml az antibiotikum koncentrációja 1 ml-ben.
4) A S. aureus béta-laktamáz termelő képességének meghatározása. Egy penicillinre érzékeny standard staphylococcus törzs napi húsleves tenyészetének 0,5 ml-ét tartalmazó lombikba öntsünk 20 ml megolvasztott és 45 °C-ra hűtött tápagart, keverjük össze és öntsük egy Petri-csészébe. Miután az agar megszilárdult, egy penicillint tartalmazó korongot helyezünk az edény közepére a táptalaj felületére. A vizsgált tenyészeteket a korong sugarai mentén hurokkal vetjük be. Az oltásokat 37 °C-on másnapig inkubáljuk, majd feljegyezzük a kísérlet eredményeit. A vizsgált baktériumok béta-laktamáz termelő képességét egy standard staphylococcus törzs növekedése alapján ítélik meg a vizsgált tenyészetek egyike vagy másik körül (a korong körül).
2. Zavarok immunrendszer: elsődleges és másodlagos immunhiányok.Immunhiányok - Ezek a normál immunállapot megsértése, amelyet egy vagy több immunválasz mechanizmusának hibája okoz. Primer vagy veleszületett immunhiányok Az immunrendszeri rendellenességek hatással lehetnek az immunrendszer működésének fő specifikus kapcsolataira és a nem specifikus rezisztenciát meghatározó tényezőkre . Az immunrendszeri rendellenességek kombinált és szelektív változatai lehetségesek. A rendellenességek mértékétől és jellegétől függően humorális, celluláris és kombinált immunhiányt különböztetnek meg.
Okoz: kromoszómák megkettőződése, pontmutációk, nukleinsav-anyagcsere enzimek defektusa, genetikailag meghatározott membránzavarok, genomkárosodás az embrionális periódusban stb. Az elsődleges immunhiányok a születés utáni időszak korai szakaszában jelentkeznek, és autoszomális recesszív módon öröklődnek. Megnyilvánulások- a fagocitózis, a komplementrendszer, a humorális immunitás (B-rendszer), a celluláris immunitás (T-rendszer) elégtelensége. Másodlagos vagy szerzett immunhiányok A másodlagos immunhiány az elsődlegesekkel ellentétben olyan egyénekben alakul ki, akiknek születésétől fogva normálisan működik az immunrendszere. Fenotípus szinten a környezet hatására alakulnak ki, és az immunrendszer működési zavarai okozzák különböző betegségek vagy a szervezetre gyakorolt káros hatások következtében. Az immunitás T- és B-rendszere, a nem specifikus rezisztencia faktorai érintettek, ezek kombinációi is lehetségesek. A másodlagos immunhiány sokkal gyakoribb, mint az elsődleges. A másodlagos immunhiányok immunkorrekcióra alkalmasak,
Másodlagos immunhiányok lehetnek:
fertőzések (különösen vírusos) és inváziók (protozoális és helmintiázisok) után;
égési betegséggel;
urémiával; daganatokkal;
anyagcserezavarokkal és kimerültséggel;
diszbiózissal;
súlyos sérülésekkel, kiterjedt sebészeti beavatkozásokkal, különösen általános érzéstelenítéssel; besugárzáskor vegyszerek hatása;
az öregedéssel,
gyógyszerek szedésével összefüggő gyógyszerek.
A klinikai adatok szerint Az áramlás megkülönböztethető: 1) kompenzált, - a szervezet fokozott érzékenysége a fertőző ágensekre. 2) szubkompenzált - a fertőző folyamatok kronizálása.
3) dekompenzált - opportunista mikrobák (OPM) és rosszindulatú daganatok által okozott generalizált fertőzések.
3. Az amőbiasis kórokozója. Taxonómia. Jellegzetes. Mikrobiológiai diagnosztika. specifikus kezelés. Az amőbiasis az Entamoeba histolytica által okozott fertőző betegség, amelyet a vastagbél fekélyes elváltozásai kísérnek; lehetséges tályogok kialakulása a különböző szervekben; krónikusan fut. Protozoa, Sarcomastidophora törzs, Sarcodina altörzs.
Morfológia és termesztés. A kórokozó két fejlődési szakaszban létezik: vegetatív és cisztás. A vegetatív szakasznak többféle formája van (szöveti, nagy vegetatív, luminális és precisztás). A ciszta (nyugalmi állapot) ovális alakú, a bélben lévő vegetatív formákból képződik. A fertőzés akkor következik be, amikor a kórokozó cisztái bejutnak a bélbe, ahol bélben vegetatív formákat alkotnak.
ellenállás. A testen kívül a kórokozó szöveti és luminális formái gyorsan (30 perc elteltével) elpusztulnak. A ciszták stabilak a környezetben, egy hónapig a székletben és a 20ºC-os vízben maradnak. Az élelmiszerekben, zöldségeken és gyümölcsökön a ciszták több napig fennállnak.
Átviteli mechanizmus - széklet-de-orális. A fertőzés akkor következik be, amikor a cisztákat élelmiszerrel, különösen zöldségekkel és gyümölcsökkel, ritkábban vízzel, háztartási cikkeken keresztül juttatják be. A legyek és a csótányok hozzájárulnak a ciszták terjedéséhez.
Patogenezis és klinikai kép. A belekbe került ciszták és a lumen által alkotott amőba formái megélhetnek benne betegséget sem okozva. A szervezet ellenállásának csökkenésével az amőba behatol a bélfalba és szaporodik. Intestinalis amebiasis alakul ki. A bél mikroflóra egyes képviselői hozzájárulnak ehhez a folyamathoz. A vastagbél felső részét érinti a fekélyek kialakulása, néha a végbél. Gyakori a laza széklet. A székletben gennyes elemek és nyálka található. Perforáció léphet fel bélfal gennyes hashártyagyulladás kialakulásával. A véráramú amőbák bejuthatnak a májba, a tüdőbe, az agyba - extraintestinalis amőbiasis alakul ki. Talán a bőr amebiasis megjelenése, amely egy másodlagos folyamat eredményeként alakul ki. Eróziók és fájdalommentes fekélyek alakulnak ki a perianális régió, a perineum és a fenék bőrén. Immunitás. Amőbiasis esetén az immunitás instabil. Kezelés és megelőzés. A kezelés során a következő gyógyszereket alkalmazzák: a bél lumenében elhelyezkedő amőbákra ható (oxikinolin származékok - kviniofon, enteroseptol, mexaform, intestopan, valamint arzénvegyületek - aminarson, osarsol stb.); az amőbák szöveti formáira ható (emetin készítmények); a bélfalban elhelyezkedő amőbák és amőbák áttetsző formáira ható (tetraciklinek); amőbákra ható bármely lokalizációjukban (imidazol származékok - metronidazol). Megelőzés az amőbiasis a cisztás kiválasztók és amőbahordozók azonosításával és kezelésével jár együtt.
Mikrobiológiai diagnosztika. A fő módszer a páciens székletének, valamint a belső szervek tályog tartalmának mikroszkópos vizsgálata. A keneteket Lugol-oldattal vagy hematoxilinnal festik meg, hogy azonosítsák a cisztákat és a trofozoitokat. Szerológiai módszer: RIGA, ELISA, RSK stb. A legmagasabb antitest titert extraintestinalis amoebiasisban mutatják ki.
| " |
Azt is ajánljuk
A gyerek fél iskolába menni Ha apa volt az iskolában, félek elmenni
Pavel Petrovich Ershov "Púpos ló" című irodalmi meséjének elemzése
Mi a teendő, ha a férj engem hibáztat minden veszekedésért
Leírás az orosz télhez
Státuszok a pletykákról és az irigy nőkről
A jelentéssel bíró pletykákról szóló állapotok menők