यह विशिष्ट वायरल एंटीजन - डायग्नोस्टिकम या विशेष परीक्षण प्रणालियों का उपयोग करके सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं में रोगी के रक्त में एंटीवायरल एंटीबॉडी के निर्धारण पर आधारित है। वायरल संक्रमण में सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं एक तरल माध्यम (आरएसके, आरटीजीए, आरएनजीए, रोंगा, आरटीओंजीए, आरआईए) में, एक जेल (आरपीजी, आरआरजी, आरवीआईईएफ) में या एक ठोस-चरण वाहक (उदाहरण के लिए, दीवारों पर) में डाली जाती हैं। प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के घटकों में से एक के निर्धारण के साथ एक पॉलीस्टायर्न प्लेट का एक कुआं - एंटीजन या एंटीबॉडी)। एलिसा, आईईएम, आरजीएडीएसटीओ, आरआईएफ, आरजीएडी, आरटीजीएडी जैसे ठोस चरण विधियों को जाना जाता है।

अक्सर बहुसंख्यकों के रक्त में उपस्थित होने के कारण स्वस्थ लोगप्राकृतिक एंटीवायरल एंटीबॉडी, सीरोलॉजिकल डायग्नोस्टिक्स विषाणु संक्रमणशोध के आधार पर युग्मित सीरम,एंटीबॉडी टिटर में वृद्धि को निर्धारित करने के लिए शुरुआत में और रोग की ऊंचाई पर या स्वास्थ्य लाभ की अवधि के दौरान लिया जाता है। एंटीबॉडी टिटर में चार गुना या उससे अधिक की वृद्धि को नैदानिक ​​रूप से महत्वपूर्ण माना जाता है।

एरिथ्रोसाइट्स (RNGA, RONGA, RTONGA, RGadsTO, RRG) पर एंजाइमों (ELISA), रेडियोधर्मी आइसोटोप (RIA, RPG) या फ्लोरोक्रोमेस (RIF) के साथ लेबल किए गए एंटीजन या एंटीबॉडी के सोखने से सीरोलॉजिकल तरीकों की संवेदनशीलता में वृद्धि होती है। पूरक (आरसीसी, आरआरजी) की उपस्थिति में एंटीजन और एंटीबॉडी की बातचीत के दौरान एरिथ्रोसाइट लिसिस का भी (एक संकेतक प्रणाली के रूप में) उपयोग किया जाता है।

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (सीएफआर)ठंड में पूरक निर्धारण के रूप में (रात के दौरान +4 0 सी के तापमान पर) अक्सर वायरोलॉजी में कई वायरल संक्रमणों के पूर्वव्यापी निदान के लिए और रोगियों से सामग्री में वायरस-विशिष्ट एंटीजन के निर्धारण के लिए उपयोग किया जाता है। .

रेडियल हेमोलिसिस प्रतिक्रिया (आरआरएच) agarose जेल में पूरक की उपस्थिति में वायरस-विशिष्ट एंटीबॉडी के प्रभाव में एक एंटीजन के साथ संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स के हेमोलिसिस की घटना पर आधारित है और इन्फ्लूएंजा, एआरवीआई, रूबेला, कण्ठमाला और टोगावायरस संक्रमण के सीरोलॉजिकल निदान के लिए उपयोग किया जाता है।

प्रतिक्रिया को स्थापित करने के लिए, भेड़ एरिथ्रोसाइट्स (10% निलंबन के 0.3 मिलीलीटर) में 0.1 मिलीलीटर undiluted वायरल एंटीजन जोड़ा जाता है, और मिश्रण को कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए ऊष्मायन किया जाता है। संवेदी एरिथ्रोसाइट्स के 0.3 मिलीलीटर और पूरक के 0.1 मिलीलीटर को 42 0 सी के तापमान पर 1.2% agarose में जोड़ा जाता है, मिश्रण को कांच की स्लाइड्स पर या पॉलीस्टायर्न प्लेटों के कुओं में डाला जाता है, जमे हुए agarose जेल में छेद काट दिया जाता है पंच और अध्ययन और नियंत्रण सेरा से भरा हुआ। ग्लास या पैनल ढक्कन के साथ बंद कर दिए जाते हैं और थर्मोस्टैट में 16-18 घंटे के लिए नम कक्ष में रखे जाते हैं। प्रतिक्रिया के लिए लेखांकन सीरम से भरे छिद्रों के आसपास हेमोलिसिस क्षेत्र के व्यास के अनुसार किया जाता है। नियंत्रण में कोई हेमोलिसिस नहीं है।

एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया के आधार पर सीरोलॉजिकल निदान का उपयोग दोनों को निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है, और वायरल संक्रमण के एटियलजि को निर्धारित करने में भी भूमिका निभाता है, भले ही नकारात्मक परिणामवायरस अलगाव।

सीरोलॉजिकल निदान की सफलता प्रतिक्रिया की विशिष्टता और शरीर द्वारा एंटीबॉडी के संश्लेषण के लिए आवश्यक रक्त लेने के लिए अस्थायी शर्तों के अनुपालन पर निर्भर करती है।

ज्यादातर मामलों में, युग्मित रक्त सीरा का उपयोग किया जाता है, जिसे 2-3 सप्ताह के अंतराल पर लिया जाता है। एक सकारात्मक प्रतिक्रिया को एंटीबॉडी टिटर में कम से कम 4 गुना वृद्धि माना जाता है। यह ज्ञात है कि अधिकांश विशिष्ट एंटीबॉडी आईजीजी और आईजीएम वर्गों से संबंधित हैं, जो संक्रामक प्रक्रिया के अलग-अलग समय पर संश्लेषित होते हैं। साथ ही, आईजीएम एंटीबॉडी जल्दी हैं, और उन्हें निर्धारित करने के लिए उपयोग किए जाने वाले परीक्षणों का उपयोग प्रारंभिक निदान के लिए किया जाता है (यह एक सीरम की जांच करने के लिए पर्याप्त है)। आईजीजी वर्ग के एंटीबॉडी को बाद में संश्लेषित किया जाता है और लंबे समय तक संग्रहीत किया जाता है।

वायरस टाइपिंग के लिए, पीएच का उपयोग समूह-विशिष्ट निदान के लिए किया जाता है, उदाहरण के लिए, एडेनोवायरस संक्रमण के लिए, वे उपयोग करते हैं पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया(आरएसके)। सबसे ज्यादा इस्तेमाल किया जाता है रक्तगुल्म निषेध प्रतिक्रिया(आरटीजीए), आरएसके, आरआईएफ, निष्क्रिय प्रतिक्रियातथा रिवर्स पैसिव हेमग्लूटीनेशन(RPGA, ROPGA), एलिसा के विभिन्न रूप, जो लगभग हर जगह RIA की जगह लेते हैं, इसकी संवेदनशीलता के बराबर है।

आरटीजीएहेमाग्लगुटिनेटिंग वायरस के कारण होने वाले रोगों का निदान करने के लिए उपयोग किया जाता है। यह जोड़े गए मानक वायरस के रोगी के सीरम में एंटीबॉडी के बंधन पर आधारित है। प्रतिक्रिया संकेतक एरिथ्रोसाइट्स होते हैं जो विशिष्ट एंटीबॉडी की अनुपस्थिति में वायरस (एक विशेषता "छाता" का गठन) द्वारा एकत्रित होते हैं और यदि वे मौजूद होते हैं तो नीचे, गैर-एग्लूटिनेटेड होते हैं।

आरएसकेपारंपरिक सीरोलॉजिकल परीक्षणों में से एक है और इसका उपयोग कई वायरल संक्रमणों के निदान के लिए किया जाता है। प्रतिक्रिया में दो प्रणालियां भाग लेती हैं: रोगी के सीरम + मानक वायरस और भेड़ एरिथ्रोसाइट्स + एंटीबॉडी के एंटीबॉडी, साथ ही एक शीर्षक पूरक। यदि एंटीबॉडी और वायरस मेल खाते हैं, तो यह कॉम्प्लेक्स पूरक को बांधता है और भेड़ एरिथ्रोसाइट्स का लसीका नहीं होता है (सकारात्मक प्रतिक्रिया)। एक नकारात्मक आरएससी के साथ, पूरक एरिथ्रोसाइट्स के विश्लेषण में योगदान देता है। विधि का नुकसान इसकी अपर्याप्त उच्च संवेदनशीलता और अभिकर्मकों के मानकीकरण की कठिनाई है।

आरएसके, साथ ही आरटीजीए के महत्व को ध्यान में रखते हुए, युग्मित सीरा का शीर्षक देना आवश्यक है, अर्थात, रोग की शुरुआत में और स्वास्थ्य लाभ के दौरान लिया जाता है।

आरपीजीए- एंटीबॉडी की उपस्थिति में वायरल एंटीजन द्वारा संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स (या पॉलीस्टायर्न बीड्स) का एग्लूटीनेशन। किसी भी वायरस को एरिथ्रोसाइट्स पर अवशोषित किया जा सकता है, भले ही उनमें हेमग्लगुटिनेटिंग गतिविधि की उपस्थिति या अनुपस्थिति हो। गैर-विशिष्ट प्रतिक्रियाओं की उपस्थिति के कारण, सीरा का परीक्षण 1:10 या उससे अधिक के कमजोर पड़ने पर किया जाता है।

आरएनजीए- वायरल एंटीजन की उपस्थिति में विशिष्ट एंटीबॉडी द्वारा संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स का एग्लूटीनेशन। ROPHA को रोगियों और रक्त दाताओं दोनों में HBs प्रतिजन का पता लगाने में सबसे बड़ा वितरण प्राप्त हुआ।

यदिविधि भी एलिसासीरम में एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जाता है। नैदानिक ​​​​उद्देश्यों के लिए एलिसा तेजी से महत्वपूर्ण और व्यापक होता जा रहा है। वायरल एंटीजन को सॉलिड फेज (पॉलीस्टाइरीन प्लेट्स या पॉलीस्टाइरीन बीड्स के कुओं के नीचे) पर सोख लिया जाता है। जब सीरम में संबंधित एंटीबॉडी को जोड़ा जाता है, तो वे adsorbed एंटीजन से जुड़ जाते हैं। एक एंजाइम (पेरोक्सीडेज) के साथ संयुग्मित एंटी-एंटीबॉडी (उदाहरण के लिए, मानव) का उपयोग करके वांछित एंटीबॉडी की उपस्थिति का पता लगाया जाता है। सब्सट्रेट जोड़ और सब्सट्रेट-एंजाइम प्रतिक्रिया रंग देती है। एलिसा का उपयोग एंटीजन को निर्धारित करने के लिए भी किया जा सकता है। इस मामले में, एंटीबॉडी को ठोस चरण पर अधिशोषित किया जाता है।

मोनोक्लोनल प्रतिरक्षी। पिछले दशक में वायरल संक्रमण के निदान में बड़ी प्रगति हुई है, जब आनुवंशिक इंजीनियरिंग अनुसंधान के विकास के साथ, मोनोक्लोनल एंटीबॉडी प्राप्त करने के लिए एक प्रणाली विकसित की गई थी। इसने नाटकीय रूप से विशिष्टता और संवेदनशीलता में वृद्धि की निदान के तरीकेवायरल एंटीजन का निर्धारण। मोनोक्लोन की संकीर्ण विशिष्टता, वायरल प्रोटीन के एक छोटे अनुपात का प्रतिनिधित्व करती है जो नैदानिक ​​सामग्री में मौजूद नहीं हो सकती है, विभिन्न वायरल निर्धारकों के लिए कई मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग करके सफलतापूर्वक दूर किया जाता है।

एंटीजन- आनुवंशिक रूप से विदेशी पदार्थ, जो किसी जानवर या मानव के शरीर में पेश किए जाने पर, एक विशिष्ट प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का कारण बनते हैं - एंटीबॉडी का संश्लेषण, संवेदनशील टी-लिम्फोसाइटों का निर्माण, प्रतिरक्षात्मक स्मृति या सहिष्णुता। विदेशी पदार्थ रासायनिक संरचनाएं हैं जो शरीर में मौजूद नहीं हैं। मानव शरीर के लिए विदेशी वायरस, सूक्ष्मजीव, साथ ही कोशिकाएं, ऊतक, जानवरों के अंग और अन्य लोग हैं। एंटीजन के पास एंटीबॉडी के लिए बाध्य करने के लिए कई रिसेप्टर्स होते हैं और जानवरों या मानव शरीर (विवो में) और शरीर के बाहर - इन विट्रो (इन विट्रो) दोनों में उनके साथ प्रतिक्रिया करने में सक्षम होते हैं।

एंटीबॉडी- रक्त सीरम के ग्लोब्युलिन अंश के उच्च आणविक भार प्रोटीन। एंटीबॉडी एक एंटीजन के प्रभाव में संश्लेषित होते हैं और संबंधित एंटीजन के साथ विशेष रूप से प्रतिक्रिया (संयोजन) करने में सक्षम होते हैं। सभी एंटीबॉडी में एक विशिष्ट इम्युनोग्लोबुलिन संरचना होती है; प्रतिरक्षाविज्ञानी, जैविक और भौतिक गुणों में भिन्न; और 5 वर्गों में विभाजित हैं - IgG, IgA, IgM, IgD और IgE।

सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं

प्रयोगशाला अभ्यास में, वे उपयोग करते हैं सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं- एंटीजन और एंटीबॉडी के बीच प्रयोगशाला प्रतिक्रियाएं, जो अध्ययन के तहत प्रणाली में पंजीकृत परिवर्तन की ओर ले जाती हैं। इन प्रतिक्रियाओं को सीरोलॉजिकल कहा जाता है, क्योंकि उनके उत्पादन के लिए एंटीबॉडी युक्त सीरम (सीरम) का उपयोग किया जाता है।

विशिष्ट एंटीबॉडी और रोगज़नक़ के प्रतिजन का पता लगाने के लिए किए गए सीरोलॉजिकल परीक्षण जब संक्रामक रोग, - अधिक उपलब्ध तरीके प्रयोगशाला निदानरोगज़नक़ की बैक्टीरियोलॉजिकल पहचान की तुलना में। कुछ मामलों में, संक्रामक रोगों के निदान के लिए सीरोलॉजिकल अध्ययन ही एकमात्र तरीका है।

प्रयोगशाला अभ्यास में प्रयुक्त एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए कुछ तरीके

सभी सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं एक एंटीजन और एक एंटीबॉडी के साथ प्रतिरक्षा परिसरों के निर्माण पर आधारित होती हैं जिन्हें इन विट्रो परीक्षणों (यानी "इन विट्रो" - एक जीवित जीव के बाहर) में पता लगाया जा सकता है। इन विट्रो सिस्टम में एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रियाएं कई घटनाओं के साथ हो सकती हैं - एग्लूटिनेशन, वर्षा, लसीका, और अन्य। प्रतिक्रिया की बाहरी अभिव्यक्तियाँ प्रतिजन (कण आकार, भौतिक अवस्था), वर्ग और प्रकार के एंटीबॉडी के साथ-साथ प्रायोगिक स्थितियों (मध्यम स्थिरता, नमक एकाग्रता, पीएच, तापमान) के भौतिक रासायनिक गुणों पर निर्भर करती हैं।

1. पूरक बाध्यकारी प्रतिक्रिया

पूरकरक्त प्लाज्मा प्रोटीन की एक प्रणाली है, जिसमें सी (सी 1, सी 2, सी 3, ... सी 9), कारक बी, कारक डी और कई नियामक प्रोटीन द्वारा इंगित 9 घटक शामिल हैं। इनमें से कुछ घटकों में 2-3 प्रोटीन होते हैं, उदाहरण के लिए C1 तीन प्रोटीनों का एक परिसर है। ये प्रोटीन रक्तप्रवाह में घूमते हैं और कोशिका झिल्ली पर मौजूद होते हैं। पूरक जन्मजात और अर्जित प्रतिरक्षा दोनों की सबसे महत्वपूर्ण प्रणाली है। यह प्रणाली शरीर को विदेशी एजेंटों की कार्रवाई से बचाने के लिए डिज़ाइन की गई है और यह शरीर की प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के कार्यान्वयन में शामिल है। पूरक की खोज 19 वीं शताब्दी के अंत में बेल्जियम के वैज्ञानिक जे। बोर्डे ने की थी।

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (सीएफआर)- पूरक-फिक्सिंग एंटीबॉडी और एंटीजन की मात्रा निर्धारित करने के लिए उपयोग किया जाने वाला एक सीरोलॉजिकल परीक्षण। पहली बार 1901 में बोर्डेट और झांगु (बोर्डेट - गेंगौ) द्वारा वर्णित किया गया था। आरएसके इस तथ्य पर आधारित है कि एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स प्रतिक्रिया मिश्रण में जोड़े गए पूरक को अवशोषित करने में सक्षम है। जब एंटीजन और एंटीबॉडी एक दूसरे के अनुरूप होते हैं, तो वे एक प्रतिरक्षा परिसर बनाते हैं, जिससे पूरक जुड़ा होता है। विशिष्ट प्रतिरक्षा परिसर प्रणाली में जोड़े गए पूरक को सोख लेता है, अर्थात। प्रतिजन-एंटीबॉडी परिसर द्वारा पूरक का बंधन। जितने अधिक एंटीबॉडी, उतने ही अधिक पूरक निश्चित होते हैं। यदि एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स नहीं बनता है, तो पूरक मुक्त रहता है।

सीएससी की जटिलता यह है कि "एंटीजन - एंटीबॉडी - पूरक" परिसर के गठन की प्रतिक्रिया अदृश्य है। प्रतिक्रिया के घटकों की पहचान करने के लिए एक अतिरिक्त संकेतक हेमोलिटिक प्रणाली का उपयोग किया जाता है। हेमोलिसिस प्रतिक्रिया की मदद से, परिमाणएंटीसेरम के साथ प्रतिजन की प्रतिक्रिया के अंत के बाद अवशेषों को पूरक करें।

पूरक निर्धारण परीक्षण (आरसीटी) का उपयोग किसी विशिष्ट प्रतिजन के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाने या किसी ज्ञात एंटीबॉडी द्वारा प्रतिजन के प्रकार को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। इस जटिल सीरोलॉजिकल प्रतिक्रिया में दो सिस्टम और पूरक शामिल हैं। पहली प्रणाली - बैक्टीरियोलॉजिकल (मुख्य), में एक एंटीजन और एक एंटीबॉडी होते हैं। दूसरी प्रणाली हेमोलिटिक (संकेतक) है। इसमें भेड़ एरिथ्रोसाइट्स (एंटीजन) और उनके संबंधित हेमोलिटिक सीरम (एंटीबॉडी) शामिल हैं।

आरएसके को दो चरणों में रखा जाता है: पहला, एंटीजन को परीक्षण रक्त सीरम के साथ जोड़ा जाता है, जिसमें एंटीबॉडी की खोज की जाती है, और फिर पूरक जोड़ा जाता है। यदि एंटीजन और एंटीबॉडी मेल खाते हैं, तो एक प्रतिरक्षा परिसर बनता है जो पूरक को बांधता है। सीरम में एंटीबॉडी की अनुपस्थिति में, प्रतिरक्षा परिसर नहीं बनता है और पूरक मुक्त रहता है। चूंकि कॉम्प्लेक्स द्वारा पूरक सोखना की प्रक्रिया नेत्रहीन अदृश्य है, इस प्रक्रिया को प्रकट करने के लिए एक हीम सिस्टम जोड़ा जाता है।

इसकी उच्च संवेदनशीलता के कारण, पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (सीएफआर) का उपयोग बैक्टीरिया और वायरल संक्रमणों के सीरोलॉजिकल निदान, एलर्जी की स्थिति और एंटीजन (पृथक जीवाणु संस्कृति) की पहचान के लिए दोनों के लिए किया जाता है।

वर्षा प्रतिक्रिया (आरपी)(लैटिन प्रैसिपिटियो से - वर्षा, नीचे गिरना) एक विशिष्ट प्रतिरक्षा परिसर की वर्षा पर आधारित होता है जिसमें घुलनशील एंटीजन और इलेक्ट्रोलाइट की उपस्थिति में एक विशिष्ट एंटीबॉडी होता है। प्रतिक्रिया के परिणामस्वरूप, एक बादल की अंगूठी या एक ढीला अवक्षेप बनता है - एक अवक्षेप। एक पानी में घुलनशील प्रतिजन और एक एंटीबॉडी के बीच एक वर्षा प्रतिक्रिया होती है, जिसके परिणामस्वरूप बड़े परिसरों का अवक्षेपण होता है

3. फ्लोक्यूलेशन प्रतिक्रिया

फ्लोक्यूलेशन प्रतिक्रिया (रेमन के अनुसार)(लैटिन फ्लोकस से - ऊन के गुच्छे, फ्लोकुली - कतरे, गुच्छे; फ्लोक्यूलेशन - बिखरे हुए चरण के छोटे कणों से ढीले फ्लोकुलेंट समुच्चय (फ्लोकुली) का निर्माण) - परीक्षण के दौरान एक टेस्ट ट्यूब में ओपेलेसेंस या फ्लोकुलेंट मास (इम्युनोप्रेजर्वेशन) की उपस्थिति विष की प्रतिक्रिया - एंटीटॉक्सिन या एनाटॉक्सिन - एंटीटॉक्सिन। इसका उपयोग गतिविधि को निर्धारित करने के लिए किया जाता है एंटीटॉक्सिक सीरमया टॉक्सोइड।

फ्लोक्यूलेशन प्रतिक्रिया "प्रारंभिक" फ्लोक्यूलेशन का पता लगाने पर आधारित है - सामग्री के इष्टतम मात्रात्मक अनुपात में एक्सोटॉक्सिन (एनाटॉक्सिन) + एंटीटॉक्सिन के एक परिसर के गठन के दौरान मैलापन।

4. एग्लूटिनेशन रिएक्शन

भागों का जुड़ना(लैटिन agglutinatio से - संबंध) एक विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ एक एंटीजन की बातचीत की प्रतिक्रिया है, जो खुद को बंधन के रूप में प्रकट करता है। इस मामले में, कण-कोशिकाओं (माइक्रोबियल कोशिकाओं, एरिथ्रोसाइट्स, आदि) के रूप में प्रतिजनों को एंटीबॉडी द्वारा एक साथ चिपकाया जाता है और गुच्छे के रूप में अवक्षेप (एग्लूटिनेट) होता है। एग्लूटीनेट आमतौर पर नग्न आंखों को दिखाई देते हैं। होने वाली प्रतिक्रिया के लिए, एग्लूटीनेशन प्रक्रिया को तेज करते हुए इलेक्ट्रोलाइट्स (उदाहरण के लिए, आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान) की उपस्थिति आवश्यक है।

एग्लूटीनेशन टेस्ट (आरए) का उपयोग करके, रिएक्टियो एग्लूटिनेशनिस (इंग्लिश एग्लूटिनेशन टेस्ट), एंटीबॉडी या कॉर्पसकुलर एंटीजन का पता लगाया जाता है। उपयोग किए जाने वाले इम्युनोडायग्नोस्टिकम के प्रकार के आधार पर, माइक्रोबियल एग्लूटिनेशन, हेमाग्लगुटिनेशन, लेटेक्स एग्लूटिनेशन, कोएग्लूटिनेशन आदि की प्रतिक्रियाएं होती हैं।

5. अवक्षेपण अभिक्रियाओं में शामिल प्रतिरक्षी का नाम

तलछटी प्रतिक्रियाओं में शामिल एंटीबॉडी को एंटीजन के साथ उनकी बातचीत के लिए पारंपरिक नाम मिला:

एग्लूटीनिन - कॉर्पसकुलर एंटीजन के एग्लूटीनेशन का कारण बनता है - एग्लूटीनोजेन और एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स (एग्लूटिनेट) की वर्षा;

प्रीसिपिटिन - घुलनशील एंटीजन - प्रीसिपिटिनोजेन के साथ एक अवक्षेप बनाते हैं।

बैक्टीरियोलिसिन (बैक्टीरिया का कारण) और हेमोलिसिन (लाल रक्त कोशिकाओं का कारण) लिटिक प्रतिक्रियाओं में शामिल हैं।

एचआईवी संक्रमण
एचआईवी संक्रमण मानव इम्युनोडेफिशिएंसी वायरस (एचआईवी) के कारण होने वाली बीमारी है, लंबे समय तकलिम्फोसाइट्स, मैक्रोफेज, तंत्रिका ऊतक की कोशिकाओं में बनी रहती है, जिसके परिणामस्वरूप प्रतिरक्षा को धीरे-धीरे प्रगतिशील क्षति होती है और तंत्रिका तंत्रजीव, माध्यमिक संक्रमण, ट्यूमर, सबस्यूट एन्सेफलाइटिस और अन्य रोग परिवर्तनों से प्रकट होता है।
रोगजनकों - टी-वें और दूसरे प्रकार के मानव इम्युनोडेफिशिएंसी वायरस - एचआईवी -1, एचआईवी -2 (एचआईवी-आई, एचआईवी -2, मानव इम्यूनोडिफीसिअन्सी वायरस, प्रकार I, 11) - रेट्रोवायरस के परिवार से संबंधित हैं, एक उपपरिवार धीमा वायरस। विषाणु गोलाकार कण होते हैं जिनका व्यास 100-140 एनएम होता है। वायरल कण में एक बाहरी फॉस्फोलिपिड शेल होता है, जिसमें ग्लाइकोप्रोटीन (संरचनात्मक प्रोटीन) शामिल होते हैं आणविक वजनकिलोडाल्टन में मापा जाता है। एचआईवी -1 में, ये जीपी 160, जीपी 120, जीपी 41 हैं। नाभिक को कवर करने वाले वायरस का आंतरिक लिफाफा भी ज्ञात आणविक भार वाले प्रोटीन द्वारा दर्शाया जाता है - पी 17, पी 24, पी 55 (एचआईवी -2 में जीपी होता है) 140, जीपी 105, जीपी 36, पी 16, पी 25, पी 55)।
एचआईवी जीनोम में आरएनए और एंजाइम रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस (रिवर्टेज) होता है। रेट्रोवायरस जीनोम को मेजबान सेल के जीनोम से जोड़ने के लिए, डीएनए को पहले वायरल आरएनए टेम्प्लेट पर रिवर्सटेज़ का उपयोग करके संश्लेषित किया जाता है। प्रोवायरस डीएनए को तब मेजबान सेल के जीनोम में एकीकृत किया जाता है। एचआईवी में एक स्पष्ट एंटीजेनिक परिवर्तनशीलता है, जो इन्फ्लूएंजा वायरस से काफी अधिक है।
मानव शरीर में, एचआईवी का मुख्य लक्ष्य टी-लिम्फोसाइट्स हैं जो सतह पर चलते हैं सबसे बड़ी संख्यासीडी 4 रिसेप्टर्स। एचआईवी रिवर्सटेज की मदद से कोशिका में प्रवेश करने के बाद, वायरस अपने आरएनए के पैटर्न के आधार पर डीएनए को संश्लेषित करता है, जो मेजबान सेल (टी-लिम्फोसाइट्स) के आनुवंशिक तंत्र में एकीकृत होता है और एक प्रोवायरस की स्थिति में जीवन के लिए वहां रहता है। . टी-लिम्फोसाइट्स-हेल्पर्स के अलावा, मैक्रोफेज, बी-लिम्फोसाइट्स प्रभावित होते हैं। तंत्रिका संबंधी कोशिकाएं, आंतों की श्लेष्मा और कुछ अन्य कोशिकाएं। टी-लिम्फोसाइट्स (सीडी 4 कोशिकाओं) की संख्या में कमी का कारण न केवल वायरस का प्रत्यक्ष साइटोपैथिक प्रभाव है, बल्कि असंक्रमित कोशिकाओं के साथ उनका संलयन भी है। एचआईवी संक्रमित रोगियों में टी-लिम्फोसाइटों की हार के साथ, बी-लिम्फोसाइटों के पॉलीक्लोनल सक्रियण को सभी वर्गों, विशेष रूप से आईजीजी और आईजीए के इम्युनोग्लोबुलिन के संश्लेषण में वृद्धि और प्रतिरक्षा प्रणाली के इस खंड के बाद में कमी के साथ नोट किया जाता है। अल्फा-इंटरफेरॉन, बीटा-2-माइक्रोग्लोबुलिन ए के स्तर में वृद्धि और इंटरल्यूकिन -2 के स्तर में कमी से प्रतिरक्षा प्रक्रियाओं का अपचयन भी प्रकट होता है। प्रतिरक्षा प्रणाली की शिथिलता के परिणामस्वरूप, विशेष रूप से टी-लिम्फोसाइट्स (सीडी 4) की संख्या में 400 या उससे कम कोशिकाओं में प्रति 1 μl रक्त में कमी के साथ, अनियंत्रित एचआईवी प्रतिकृति के लिए स्थितियाँ उत्पन्न होती हैं, जिसमें विरिअन की संख्या में उल्लेखनीय वृद्धि होती है। शरीर के विभिन्न वातावरणों में। प्रतिरक्षा प्रणाली के कई हिस्सों की हार के परिणामस्वरूप, एचआईवी से संक्रमित व्यक्ति रोगजनकों के खिलाफ रक्षाहीन हो जाता है। विभिन्न संक्रमण. इम्यूनोसप्रेशन बढ़ने के फ़ोयर में, गंभीर प्रगतिशील बीमारियां विकसित होती हैं जो सामान्य रूप से काम करने वाले व्यक्ति में नहीं होती हैं प्रतिरक्षा तंत्र. डब्ल्यूएचओ ने इन रोगों को एड्स मार्कर (संकेतक) के रूप में परिभाषित किया।
पहला समूह - रोग जो केवल गंभीर इम्युनोडेफिशिएंसी (200 से नीचे सीडी 4 स्तर) में निहित हैं। एंटी-एचआईवी एंटीबॉडी या एचआईवी एंटीजन की अनुपस्थिति में नैदानिक ​​निदान किया जाता है।
दूसरा समूह - रोग जो दोनों पृष्ठभूमि के खिलाफ विकसित होते हैं गंभीर इम्युनोडेफिशिएंसी, और कुछ मामलों में इसके बिना। इसलिए, ऐसे मामलों में, निदान की प्रयोगशाला पुष्टि आवश्यक है।

प्रयोगशाला निदान

यूडीसी-078

वायरल संक्रमण का प्रयोगशाला निदान

एन.एन. नोसिक, वी.एम. स्टेखानोव

वायरोलॉजी संस्थान। डि इवानोव्स्की रैम्स, मॉस्को

वायरल संक्रमण का प्रयोगशाला निदान

एन.एन. नोसिक, वी.एम. स्टाचानोवा

परिचय

एंटीवायरल दवाओं, इम्युनोमोड्यूलेटर और टीकों के उपयोग के साथ वायरल रोगों के उपचार और रोकथाम में अवसरों के विस्तार के लिए कार्रवाई के विभिन्न तंत्रों के साथ तेजी से और सटीक प्रयोगशाला निदान की आवश्यकता होती है। कुछ एंटीवायरल की संकीर्ण विशिष्टता के लिए भी संक्रमित एजेंट के तेजी से और अत्यधिक विशिष्ट निदान की आवश्यकता होती है। एंटीवायरल थेरेपी की निगरानी के लिए वायरस का पता लगाने के लिए मात्रात्मक तरीकों की आवश्यकता थी। रोग के एटियलजि को स्थापित करने के अलावा, महामारी विरोधी उपायों के आयोजन में प्रयोगशाला निदान महत्वपूर्ण है।

महामारी के संक्रमण के पहले मामलों का शीघ्र निदान महामारी विरोधी उपायों के समय पर कार्यान्वयन की अनुमति देता है - संगरोध, अस्पताल में भर्ती, टीकाकरण, आदि। संक्रामक रोगों, जैसे कि चेचक को खत्म करने के लिए कार्यक्रमों के कार्यान्वयन से पता चला है कि जैसे ही वे लागू होते हैं, की भूमिका प्रयोगशाला निदान बढ़ता है। रक्त सेवा और प्रसूति अभ्यास में प्रयोगशाला निदान द्वारा एक आवश्यक भूमिका निभाई जाती है, उदाहरण के लिए, संक्रमित दाताओं की पहचान मानव प्रतिरक्षी न्यूनता विषाणु(एचआईवी), हेपेटाइटिस बी वायरस (एचबीवी), गर्भवती महिलाओं में रूबेला और साइटोमेगालोवायरस संक्रमण का निदान।

निदान के तरीके

वायरल संक्रमण के प्रयोगशाला निदान के तीन मुख्य दृष्टिकोण हैं (तालिका 1, तालिका 2):

1) वायरल एंटीजन या न्यूक्लिक एसिड की उपस्थिति के लिए सामग्री की प्रत्यक्ष परीक्षा;

2) नैदानिक ​​सामग्री से वायरस का अलगाव और पहचान;

3) रोग के दौरान वायरल एंटीबॉडी में उल्लेखनीय वृद्धि की स्थापना के आधार पर सीरोलॉजिकल निदान।

वायरल डायग्नोस्टिक्स के लिए किसी भी चुने हुए दृष्टिकोण के साथ, सबसे महत्वपूर्ण कारकों में से एक परीक्षण सामग्री की गुणवत्ता है। इसलिए, उदाहरण के लिए, नमूने के प्रत्यक्ष विश्लेषण के लिए या वायरस के अलगाव के लिए, परीक्षण सामग्री रोग की शुरुआत में ही प्राप्त की जानी चाहिए, जब रोगज़नक़ अभी भी अपेक्षाकृत बड़ी मात्रा में उत्सर्जित होता है और अभी तक एंटीबॉडी से बाध्य नहीं है, और नमूने की मात्रा प्रत्यक्ष अनुसंधान के लिए पर्याप्त होनी चाहिए। कथित बीमारी के अनुसार सामग्री का चयन करना भी महत्वपूर्ण है, यानी वह सामग्री जिसमें संक्रमण के रोगजनन के आधार पर, वायरस की उपस्थिति की संभावना सबसे बड़ी है।

सफल निदान में एक महत्वपूर्ण भूमिका उस वातावरण द्वारा निभाई जाती है जिसमें सामग्री ली जाती है, इसे कैसे ले जाया जाता है और इसे कैसे संग्रहीत किया जाता है। तो, नासॉफिरिन्जियल या रेक्टल स्वैब, पुटिकाओं की सामग्री को एक प्रोटीन युक्त माध्यम में रखा जाता है जो वायरस की संक्रामकता के तेजी से नुकसान को रोकता है (यदि अलगाव की योजना बनाई गई है), या एक उपयुक्त बफर में (यदि यह न्यूक्लिक एसिड के साथ काम करने की योजना है) )

नैदानिक ​​सामग्री के निदान के लिए प्रत्यक्ष तरीके

प्रत्यक्ष विधियाँ वे विधियाँ हैं जो किसी वायरस, वायरल एंटीजन या वायरल का पता लगाने की अनुमति देती हैं न्यूक्लिक अम्ल(एनसी) सीधे नैदानिक ​​सामग्री में, यानी वे सबसे तेज (2-24 घंटे) हैं। हालांकि, रोगजनकों की कई विशेषताओं के कारण, प्रत्यक्ष विधियों की अपनी सीमाएं हैं (झूठे सकारात्मक और झूठे नकारात्मक परिणाम प्राप्त करने की संभावना)। इसलिए, उन्हें अक्सर अप्रत्यक्ष तरीकों से पुष्टि की आवश्यकता होती है।

इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (ईएम)। इस तरीके का इस्तेमाल करके आप असली वायरस का पता लगा सकते हैं। वायरस का सफलतापूर्वक पता लगाने के लिए, नमूने में इसकी सांद्रता लगभग 1 · 10 6 कण प्रति 1 मिली होनी चाहिए। लेकिन चूंकि रोगज़नक़ की एकाग्रता, एक नियम के रूप में, रोगियों की सामग्री में महत्वहीन है, वायरस की खोज मुश्किल है और उच्च गति सेंट्रीफ्यूजेशन का उपयोग करके इसकी प्रारंभिक वर्षा की आवश्यकता होती है, जिसके बाद नकारात्मक धुंधला हो जाता है। इसके अलावा, EM वायरस टाइप करने की अनुमति नहीं देता है, क्योंकि उनमें से कई में परिवार के भीतर रूपात्मक अंतर नहीं होते हैं। उदाहरण के लिए, हर्पीज सिम्प्लेक्स, साइटोमेगालोवायरस, या हर्पीस ज़ोस्टर वायरस रूपात्मक रूप से लगभग अप्रभेद्य हैं।

नैदानिक ​​​​उद्देश्यों के लिए उपयोग किए जाने वाले ईएम के प्रकारों में से एक है प्रतिरक्षा इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी(IEM), जिसमें वायरस के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी का उपयोग किया जाता है। वायरस के साथ एंटीबॉडी की बातचीत के परिणामस्वरूप, कॉम्प्लेक्स बनते हैं, जो नकारात्मक धुंधला होने के बाद अधिक आसानी से पहचाने जाते हैं।

IEM EM की तुलना में कुछ अधिक संवेदनशील होता है और इसका उपयोग तब किया जाता है जब वायरस को सुसंस्कृत नहीं किया जा सकता है। कृत्रिम परिवेशीय, उदाहरण के लिए, वायरल हेपेटाइटिस के रोगजनकों की खोज करते समय।

इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया (आरआईएफ)। विधि एक डाई से बंधे एंटीबॉडी के उपयोग पर आधारित है, जैसे कि फ्लोरेसिन आइसोथियोसाइनेट। रोगियों की सामग्री में वायरल एंटीजन का पता लगाने और तेजी से निदान के लिए आरआईएफ का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।

व्यवहार में, RIF के दो प्रकारों का उपयोग किया जाता है: सीधातथा अप्रत्यक्ष. पहले मामले में, वायरस के लिए डाई-लेबल एंटीबॉडी का उपयोग किया जाता है, जो संक्रमित कोशिकाओं (स्मीयर, सेल कल्चर) पर लागू होते हैं। इस प्रकार, प्रतिक्रिया एक चरण में आगे बढ़ती है। विधि की असुविधा कई वायरस के लिए संयुग्मित विशिष्ट सीरा का एक बड़ा सेट होने की आवश्यकता है।

आरआईएफ के अप्रत्यक्ष रूप में, परीक्षण सामग्री पर एक विशिष्ट सीरम लगाया जाता है, जिसके एंटीबॉडी सामग्री में मौजूद वायरल एंटीजन से बंधे होते हैं, और फिर एंटी-प्रजाति सीरम को जानवर के गामा ग्लोब्युलिन में स्तरित किया जाता है जिसमें विशिष्ट प्रतिरक्षा सीरम तैयार किया गया था, उदाहरण के लिए, एंटी-खरगोश, एंटी-हॉर्स, आदि। लाभ आरआईएफ के अप्रत्यक्ष संस्करण में केवल एक प्रकार के लेबल एंटीबॉडी की आवश्यकता होती है।

ऊपरी भाग के श्लेष्म झिल्ली से स्मीयर-प्रिंट के विश्लेषण में तीव्र श्वसन वायरल संक्रमण के एटियलजि को जल्दी से समझने के लिए आरआईएफ पद्धति का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। श्वसन तंत्र. नैदानिक ​​सामग्री में वायरस का प्रत्यक्ष पता लगाने के लिए आरआईएफ का सफल उपयोग तभी संभव है जब इसमें पर्याप्त संख्या में संक्रमित कोशिकाएं हों और सूक्ष्मजीवों द्वारा नगण्य संदूषण हो जो गैर-विशिष्ट ल्यूमिनेसिसेंस उत्पन्न कर सकते हैं।

एंजाइम इम्युनोसे (एलिसा)। वायरल एंटीजन के निर्धारण के लिए एंजाइम इम्युनोसे के तरीके सिद्धांत रूप से आरआईएफ के समान हैं, लेकिन रंजक के बजाय एंजाइमों के साथ एंटीबॉडी को लेबल करने पर आधारित हैं। सबसे व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज और क्षारीय फॉस्फेट, β-galactosidase और β-lactamases भी उपयोग किए जाते हैं। लेबल किए गए एंटीबॉडी प्रतिजन से बंधते हैं, और इस तरह के एक जटिल का पता उस एंजाइम के लिए एक सब्सट्रेट जोड़कर लगाया जाता है जिससे एंटीबॉडी संयुग्मित होते हैं। प्रतिक्रिया का अंतिम उत्पाद एक अघुलनशील अवक्षेप के रूप में हो सकता है, और फिर एक पारंपरिक प्रकाश माइक्रोस्कोप का उपयोग करके या घुलनशील उत्पाद के रूप में गणना की जाती है, जो आमतौर पर रंगीन होता है (या फ्लोरोसेंट या ल्यूमिनेस हो सकता है) और यंत्रवत रिकॉर्ड किया गया।

चूंकि घुलनशील प्रतिजनों को एलिसा द्वारा मापा जा सकता है, इसलिए नमूने में अक्षुण्ण कोशिकाओं की कोई आवश्यकता नहीं है और इस प्रकार विभिन्न प्रकार की नैदानिक ​​सामग्री का उपयोग किया जा सकता है।

एलिसा पद्धति का एक अन्य महत्वपूर्ण लाभ एंटीजन की मात्रा निर्धारित करने की क्षमता है, जो इसे आकलन करने के लिए उपयोग करने की अनुमति देता है नैदानिक ​​पाठ्यक्रमरोग और कीमोथेरेपी की प्रभावशीलता। एलिसा, आरआईएफ की तरह, प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष दोनों रूपों में इस्तेमाल किया जा सकता है।

सॉलिड-फेज एलिसा, जो एक घुलनशील रंगीन प्रतिक्रिया उत्पाद देता है, ने सबसे बड़ा वितरण पाया है। एलिसा का उपयोग एंटीजन को निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है (फिर एंटीबॉडी को ठोस चरण पर लागू किया जाता है - पॉलीस्टाइन प्लेट के कुएं के नीचे), और एंटीबॉडी निर्धारित करने के लिए (फिर एंटीजन को ठोस चरण में लागू किया जाता है)।

रेडियोइम्यूनोसे (आरआईए) . विधि रेडियोआइसोटोप के साथ एंटीबॉडी के लेबलिंग पर आधारित है, जिसने वायरल एंटीजन को निर्धारित करने में उच्च संवेदनशीलता सुनिश्चित की। 1980 के दशक में यह विधि व्यापक हो गई, विशेष रूप से एचबीवी और अन्य गैर-संवर्धन योग्य वायरस के मार्करों के निर्धारण के लिए। विधि के नुकसान में रेडियोधर्मी पदार्थों के साथ काम करने की आवश्यकता और महंगे उपकरण (गामा काउंटर) का उपयोग शामिल है।

आणविक तरीके। प्रारंभ में, एनए संकरण की अत्यधिक विशिष्ट विधि को वायरल जीनोम का पता लगाने के लिए क्लासिक विधि माना जाता था, लेकिन अब इसका उपयोग करके वायरस जीनोम का अलगाव पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन(पीसीआर)।

न्यूक्लिक एसिड का आणविक संकरण।विधि डबल-स्ट्रैंड संरचनाओं के निर्माण और एक लेबल का उपयोग करके उनका पता लगाने के साथ डीएनए या आरएनए के पूरक किस्में के संकरण पर आधारित है। इस प्रयोजन के लिए, विशेष डीएनए या आरएनए जांच का उपयोग किया जाता है, एक आइसोटोप (32 पी) या बायोटिन के साथ लेबल किया जाता है, जो डीएनए या आरएनए के पूरक किस्में का पता लगाता है। विधि के कई प्रकार हैं: - बिंदु संकरण - पृथक और विकृत एनए को फ़िल्टर पर लागू किया जाता है और फिर एक लेबल जांच जोड़ा जाता है; परिणामों का संकेत - 32 आर या धुंधला का उपयोग करके ऑटोरैडियोग्राफी - एविडिन-बायोटिन के साथ; - धब्बा संकरण - कुल डीएनए से प्रतिबंध एंडोन्यूक्लाइजेस द्वारा काटे गए NA अंशों को अलग करने और नाइट्रोसेल्यूलोज फिल्टर में स्थानांतरित करने और लेबल जांच के साथ परीक्षण करने की एक विधि; एचआईवी संक्रमण के लिए एक पुष्टिकरण परीक्षण के रूप में उपयोग किया जाता है; - संकरण बगल में- संक्रमित कोशिकाओं में एनके निर्धारित करने की अनुमति देता है।

पीसीआरप्राकृतिक डीएनए प्रतिकृति के सिद्धांत पर आधारित है। विधि का सार थर्मोस्टेबल टाक डीएनए पोलीमरेज़ और दो विशिष्ट प्राइमरों - तथाकथित प्राइमरों का उपयोग करके वायरस-विशिष्ट डीएनए अनुक्रम के संश्लेषण (प्रवर्धन) के चक्रों की पुनरावृत्ति है।

प्रत्येक चक्र में विभिन्न तापमान स्थितियों के साथ तीन चरण होते हैं। प्रत्येक चक्र में, संश्लेषित क्षेत्र की प्रतियों की संख्या दोगुनी हो जाती है। नए संश्लेषित डीएनए टुकड़े अगले प्रवर्धन चक्र में नए किस्में के संश्लेषण के लिए एक टेम्पलेट के रूप में काम करते हैं, जिससे इसके निर्धारण के लिए 25-35 चक्रों में चयनित डीएनए क्षेत्र की पर्याप्त संख्या में प्रतियां जमा करना संभव हो जाता है, आमतौर पर agarose gel द्वारा वैद्युतकणसंचलन।

विधि अत्यधिक विशिष्ट और बहुत संवेदनशील है। यह आपको परीक्षण सामग्री में वायरल डीएनए की कई प्रतियों का पता लगाने की अनुमति देता है। हाल के वर्षों में, वायरल संक्रमण (हेपेटाइटिस, दाद, साइटोमेगालोवायरस, पेपिलोमा, आदि के वायरस) के निदान और निगरानी के लिए पीसीआर का तेजी से उपयोग किया गया है।

मात्रात्मक पीसीआर का एक प्रकार विकसित किया गया है जो प्रवर्धित डीएनए साइट की प्रतियों की संख्या निर्धारित करना संभव बनाता है। तकनीक जटिल, महंगी है और अभी तक नियमित उपयोग के लिए पर्याप्त रूप से एकीकृत नहीं है।

साइटोलॉजिकल तरीके वर्तमान में सीमित नैदानिक ​​​​मूल्य के हैं, लेकिन अभी भी कई संक्रमणों में इसका उपयोग किया जाना चाहिए। ऑटोप्सी सामग्री, बायोप्सी, स्मीयर की जांच की जाती है, जो उपयुक्त प्रसंस्करण के बाद, एक माइक्रोस्कोप के तहत दाग और विश्लेषण किया जाता है। साइटोमेगालोवायरस संक्रमण के साथ, उदाहरण के लिए, ऊतक वर्गों में या मूत्र में, विशिष्ट विशाल कोशिकाएं पाई जाती हैं - "उल्लू की आंख", रेबीज के साथ - कोशिकाओं के साइटोप्लाज्म (बेब्स-नेग्री बॉडी) में समावेश। कुछ मामलों में, उदाहरण के लिए, क्रोनिक हेपेटाइटिस के विभेदक निदान में, यकृत ऊतक की स्थिति का आकलन महत्वपूर्ण है।